淫羊藿苷经Wnt/β-catenin信号通路调控骨髓间充质干细胞的成骨-成脂双向分化

摘要

目的：探讨Wnt/β-catennin信号通路介导的淫羊藿苷(Icariin)调控BMSCs（SD大鼠）成骨-成脂双向分化。
　　方法：⑴用细胞增殖、毒性试剂盒（CCK-8）检测BMSCs在多种不同浓度Icariin的干预其增殖活性的强弱及是细胞产生毒性反应。⑵用RT-qPCR确定Icariin对成骨分化指标（ALP、COL1、RUNX2）的影响，使用碱性磷酸酶（ALP）染色试剂盒和茜素红染色试剂确定经Icariin干预后ALP的活性及强弱、是否钙结节的形成及形成量。⑶用RT-qPCR确定Icariin对成脂分化指标（PPARγ、Adipsin、FABP4）的影响，使用油红O染色试剂确定脂滴的形成。⑷使用信号通路特异性抑制蛋白DKK-1联合Icariin进行干预，检测Icariin在BMSCs成骨-成脂分化的作用。⑸Western-blot及Immunofluorescence检测Icariin干预后Wnt信号通路关键蛋白P-GSK、β-catennin表达和定位情况。⑹用12周龄C57小鼠做卵巢切除模拟绝经后骨质疏松(OVX)，口服Icariin（25mg/kg，持续6周），用microCT扫描确定小鼠股骨远端的骨小梁数目，H&E染色确定小鼠股骨远端的骨小梁及髓腔中脂滴的形成数量。
　　结果：①在Icariin作用下，细胞的增殖能力得到增强。②Icariin能够促进BMSCs的成骨基因RUNX2、ALP、COL1表达、ALP及钙结节的形成；抑制成脂基因PPARγ、Adipsin、FABP4表达及脂滴的形成。DKK-1能够抑制Icariin的促成骨效应，拮抗Icariin的抑成脂效应。③Icariin干预后能够上调GSK的磷酸化程度，促进β-catennin转入核内4. Micro CT提示Icariin的干预可以减少因卵巢切除后所导致的骨小梁数目减少；H&E染色提示Icariin干预可减少因卵巢切除后所导致的骨丢失，减少髓腔内脂滴的形成。
　　结论：Icariin能促进BMSCs的增殖，并通过上调RUNX2、ALP、COL1和下调PPARγ、Adipsin、FABP4来调控BMSCs的成骨成脂分化，Icariin调控BMSCs成骨成脂分化过程中经典Wnt信号通路的介导起着重要的作用。

目录

声明

前言

参考文献

引言

材料与方法

一、 实验材料

二、 实验方法

结果

1. 淫羊藿苷促进BMSCs的增殖

2. 淫羊藿苷促进BMSCs向成骨方向分化及上调骨形成过程中相关基因表达，抑制BMSCs成脂方向分化及下调脂肪组织形成中相关基因表达

3. Wnt/β-catenin信号通路的活性因淫羊藿苷的作用而发生上调， PSK的磷酸化程度升高，β-catenin 的入核增加

4. 淫羊藿苷干预能减轻卵巢切除小鼠模型中产生的松质骨丢失

5. 淫羊藿苷能减轻卵巢切除小鼠模型中骨髓腔内脂滴的形成

讨论

参考文献

综述

附录一英文缩略表

附录二 研究生期间发表的论文

致谢