声明
1 前言
1.1 遗传性心律失常的研究进展
1.1.1长QT综合征（Long QTsyndrome type 3，LQTS）
1.1.2 Brugada 综合征（Brugada syndrome，BrS)
1.1.3心房颤动（atrial fibrillation，AF）
1.1.4进行性心脏传导障碍（progressive cardiac conduction disease，PCCD）
1.1.5病态窦房结综合征（sick sinus syndrome，SSS）
1.1.6 心律失常相关离子通道
1.2 钠离子通道Nav1.5的异常导致心律失常的发生
1.2.1 心脏离子通道Nav1.5的结构
1.2.2 Nav1.5的遗传突变导致心律失常的发生
1.2.3 Nav1.5的转录后修饰与心律失常的发生
1.3 Nav1.5 表达调控与心律失常的发生
1.4 钠通道的泛素化与疾病的发生
1.4.1 泛素化形成的分子基础
1.4.2 Nedd4-2调控钠通道的泛素化导致疾病的发生
1.5 Nav1.5的泛素化调控
1.6 UBC9依赖性的泛素修饰
1.6.1 UBC9参与的泛素化的蛋白调控
1. 6.2 UBC9突变体 UBC9C93S
1.7 本研究的主要内容
2 实验材料与方法
2.1 实验所用到的仪器
2.2 常用生物软件及查询网址
2.3 实验所用主要溶液
2.4 主要材料与试剂
2.5 质粒构建
2.5.1 pCMV-HA-UBC9质粒的构建
2.6 其它表达质粒以及UBC9 siRNA和t-CSM肽段
2.7 实时定量PCR（qRT-PCR）
2.8 细胞培养
2.8.1 细胞的复苏与冻存
2.8.2 细胞的传代
2.9 细胞转染
2.9.1 HEK293或HEK293-Nav1.5细胞的转染
2.9.2 大鼠乳鼠心肌细胞的转染
2.10 细胞膜蛋白的分离
2.11Western Blot检测
2.11.1细胞总蛋白的提取、CoIP实验与Western Blot检测蛋白表达
2.11.2 本研究所用抗体
2.12 大鼠心肌细胞的分离以及转染
2.13 电生理
2.14 蛋白酶体抑制实验
2.15 促进泛素化的实验
2.16 统计学分析
3 实验结果
3.1 过表达UBC9 下调Nav1.5的蛋白表达水平
3.2 过表达UBC9下调Nav1.5钠电流密度
3.3 干扰UBC9上调Nav1.5的蛋白表达水平
3.4 干扰UBC9上调Nav1.5的钠电流密度
3.5 敲除或过表达UBC9调控新生大鼠乳鼠心肌细胞的Nav1.5钠电流密度
3.6 t-CSM肽段不影响钠电流密度
3.7 UBC9对Nav1.5的表达调控作用不依赖于SUMO结合酶活性
3.8 UBC9通过泛素蛋白酶体途径调控Nav1.5的蛋白表达水平
3.9 UBC9和Nedd4-2相互作用
4 讨论
5 全文总结与展望
致谢
参考文献
附录Ⅰ 攻读博士学位期间发表的论文目录
附录Ⅱ 缩略词
