声明
主要英文缩略词表
前言
1. Hippo信号通路的介绍
2. Hippo信号通路成员与去泛素化酶基因家族的关系
3. Hippo信号通路成员与四次跨膜蛋白基因家族的关系
材料与方法
1. 主要试剂和耗材
2. 常用试剂配制
3. 抗体
4. 实验仪器
5. 质粒DNA的构建、扩增及提取
（1）目的质粒的获取
（2）相关质粒
（3）目的片段的获取（PCR）
（4）shRNA构建
（5）质粒DNA酶切
（6）浓度测定
（7）连接
（8）转化
（9）重组质粒的鉴定
（10）质粒DNA的扩增
（11）测序
（12）质粒DNA的扩增
（13）质粒DNA的提取
6. 细胞培养
（3）细胞传代
（4）细胞转染（以六孔板转染为例）
（5）细胞冻存保种
7. 慢病毒包装及稳转细胞系构建
（2）稳转细胞系构建（以病毒感染六孔板细胞为例）
8. 双荧光素酶报告系统实验检测
9. 蛋白质免疫印迹（Western Blot）
（1）收取细胞总蛋白
（2）WB所需试剂配制
（3）上样
（4）电泳
（5）转膜
（6）丽春红染色
（7）封闭
（8）一抗孵育
（9）二抗孵育
（10）曝光
10. 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）
11. RNA提取及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
（1）RNA提取
（2）cDNA合成
（3）实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
12. 细胞活力检测
实验结果
1. 质粒构建
2. 阳性对照实验-验证Luciferase系统的有效性
3. Hippo信号通路的双荧光素酶报告系统筛选
1）去泛素化酶家族基因的筛选
2）四次跨膜蛋白家族基因的筛选
4. 候选基因的功能验证
1）RT-qPCR定量检测Hippo信号通路下游靶基因的变化
2）Western blot检测Hippo信号通路核心成员蛋白的变化
3）免疫荧光检测YAP的细胞定位变化
4）USP2敲低抑制细胞活性
结论
讨论
参考文献
综述:Hippo信号通路及其泛素化、去泛素化调控
参考文献
致谢
