基于唾液蛋白质组学的2型糖尿病病证结合分子诊断模型研究

摘要

目的:本课题研究旨在研究2型糖尿病不同病证患者的唾液蛋白质组，筛选差异蛋白质指纹图谱，分别建立起2型糖尿病及不同中医证型的蛋白质指纹图谱诊断模型，促进2型糖尿病的“病”与“证”结合的研究，为2型糖尿病临床辨证分型的规范化、客观化提供临床依据，以期将来能够促进中医药对2型糖尿病的诊断与治疗。
　　方法:依据本课题研究的诊断标准，筛选70例2型糖尿病患者，按照相关中医辨证分型标准进行中医辨证分组，脾虚组40例，肾虚组12例，其他组18例，对照组的正常人群45例。采用病证结合分组的方法分组：1）2型糖尿病组vs正常对照组：比较分析70例2型糖尿病患者与正常人群之间差异表达的蛋白质指纹图谱，建立2型糖尿病“病”的唾液蛋白质决策树模型；2）2型糖尿病中医证型组vs正常组：将2型糖尿病按照中医辨证标准分为脾虚组、肾虚组及其他证组，并与正常对照组比较分析，建立2型糖尿病“证”的唾液蛋白质决策树诊断模型；3）中医同病异证组之间相互比较：在2型糖尿病的脾虚组、肾虚组及其他证组两两之间进行比较，筛选各组之间差异表达蛋白质峰。
　　结果:1）2型糖尿病组与正常对照组：建立了由2082.92、2499.24、2426.77m/z三个差异蛋白峰联合组成的决策树模型，敏感性为94.3％（66/70），特异性为93.3%（42/45），经过双盲验证研究，其敏感性为88.6%（62/70），特异性为77.8%（35/45）。2）2型糖尿病脾虚证与正常组比较：建立了由2082.92、2843.79m/z两个差异蛋白峰联合组成的决策树模型，其敏感性为97.5%（39/40），特异性为86.7%（39/45），通过样本回代检测验证研究，其敏感性为85%（34/40），特异性为82.2%（37/45）。3）2型糖尿病肾虚证与正常组比较：建立由5744.34、2410.88m/z两个差异蛋白峰联合组成的诊断模型，其敏感性为91.7%（11/12），特异性为95.6%（43/45），用双盲法验证分析，其敏感性为83.3%（10/12），特异性为75.6%（34/45）。4）2型糖尿病其他证与正常组比较：建立由2082.92、3036.77m/z两个差异蛋白峰联合组成的决策树模型，其敏感性为94.4%（17/18），特异性为95.6%（43/45），样本回代检测双盲验证，该决策树模型的敏感性为88.9%（16/18），特异性为93.3%（42/45）。5）中医同病异证组之间相互比较：2型糖尿病脾虚证组与肾虚证组比较，共检测到蛋白质峰有304个，其中有差异意义有9个,4蛋白质峰表达量在脾虚证组增加，5个在肾虚证组表达量增加；脾虚证组与其他证组之间有304个蛋白质峰，14个有差异统计学意义,12个蛋白峰在脾虚证组表达增加，另外2个在其他证组表达增加；肾虚证组与其他证组之间比较，分析发现蛋白质峰表达有301个，有2个表达差异意义，两组分别各有一个表达量增加。
　　结论:本研究利用液态芯片结合MALDI技术检测2型糖尿病脾虚证、肾虚证、其他证患者及正常人的唾液中的蛋白质指纹图谱，从唾液蛋白质中筛选出有意义的特异性生物标记物，并建立了相关病证结合的诊断模型，能够正确地区分2型糖尿病患者及不同的中医证型的患者，具有重要的临床诊断意义，为临床疾病诊断及中医辩证客观化开辟了新途径，并为中医微观辩证学的研究开拓了新思路。

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缩略词表

前言

12型糖尿病简述

2 唾液检测研究

3 蛋白质组学简述

1 实验试剂与仪器

1.1 主要的研究试剂

1.2 主要的研究仪器

2 研究对象的筛选及诊断标准

2.1 研究对象

2.2 病例收集时间

2.3 病例来源及实验分组

2.4 2型糖尿病的西医诊断标准

2.5 正常对照组的纳入标准

2.6 2型糖尿病的中医辨证分型标准

2.7 病例的纳入标准

2.8 病例的排除标准

2.9 病例的剔除标准

3 主要研究技术操作

3.1 唾液标本的收集

3.2 唾液标本的处理

3.3 WCX磁珠的活化

3.4 WCX磁珠的上样

3.5 WCX磁珠的洗脱

3.6 数据收集

3.7 统计学方法

4 结果

4.1 性别、年龄分布状况

4.2 唾液蛋白质指纹图谱病证结合分析

讨论

12型糖尿病的中医认识

2 病证结合的研究意义

3 蛋白质组学研究新技术

4 唾液蛋白质指纹图谱决策树模型的评估

结语

1 研究成果

2 不足之处

参考文献

附录

附录1 2型糖尿病临床观察表

附录2

附录3 综述: 唾液诊断及微观辨证的研究进展

致谢