淫羊藿胶囊调节骨矿化治疗绝经后骨质疏松症的疗效观察和机制研究

摘要

目的：从理论研究的角度总结绝经后骨质疏松症(PMOP)的发病机制，从临床研究的角度探索PMOP患者基质gla蛋白（MGP）与骨代谢的关系及胎球蛋白A-基质gla蛋白-钙磷矿化复合物（FMC）参与PMOP的发病机制，并观察中药淫羊藿胶囊治疗PMOP患者（肾阳亏虚证）的临床疗效和作用机制。
　　方法：
　　1、理论研究：
　　查阅文献，总结PMOP的发病机制，分析骨矿化异常与PMOP之间的关系；对古今相关文献进行系统的回顾总结，以了解中医对PMOP的病因病机及治则治法的认识，为临床试验研究提供理论依据。
　　2、血清基质gla蛋白与骨代谢的相关性：
　　本研究录入120例PMOP患者和60例骨量正常的绝经后妇女。通过聚合酶链式反应(PCR)检测血清MGP mRNA水平,骨状态通过骨密度（BMD）和骨转换标志物(β-CTX，P1NP）评估。此外，也检测血清雌二醇（E2）、甲状旁腺素（PTH）、血钙（Ca）、血磷（P）水平。
　　3、胎球蛋白A-基质gla蛋白-钙磷复合体(FMC)参与PMOP的机制研究：
　　选取行腰椎手术的PMOP患者和骨量正常的绝经后女性各23例，在手术时取其部分腰椎骨组织，患者血清胎球蛋白A（fetuin A）、基质gla蛋白(MGP)、骨形态发生蛋白2（BMP2）、runt相关转录因子2（RUNX2）水平采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，骨组织局部fetuin A、MGP、BMP2、RUNX2 mRNA及蛋白的表达则分别通过PCR及免疫组化的方法检测。
　　4、中药疗效研究：
　　选取PMOP患者90例，将其随机双盲分为A组（安慰剂对照组）、B组（淫羊藿胶囊低剂量组）及 C组（淫羊藿胶囊高剂量组），共治疗24周。于治疗前和治疗24周后，观测患者疼痛VAS评分、主要症候评分、中医证候积分疗效变化，并检测患者 BMD、血清中 PINP、β-CTX及血清Fetuin-A、MGP水平的变化。
　　统计学的处理：数据的分析处理采用统计软件SPSS20.0进行，所有的数据都用均数±标准差( x±s)的形式表示，统计结果出现 P＜0.05则认为差异具有统计学的意义。
　　结果
　　1、查阅文献，研究表明骨矿化异常是OP/PMOP的发病原因之一，FMC的形成是维持正常骨矿化的重要机制，但FMC是如何参与OP/PMOP发病的尚不清楚；中医学认为 OP/PMOP的发病关键在于多种原因导致的肾虚髓亏，还与脾胃虚弱、肝血不足、瘀血阻滞有关。此外，我的导师向楠教授痰浊也是OP发病的重要因素。因此中医药治疗OP/PMOP也以补肾为基础，补肾中药是否能够通过影响骨矿化从而改善 OP/PMOP的临床症状有待研究。
　　2、PMOP组与非骨质疏松组相比，BMD、MGP mRNA、β-CTX、P1NP的差异有统计学意义（P＜0.05）。PMOP患者血清MGP mRNA水平显著低于对照组(0.835±0.415 VS4.524±0.769，P<0.001),与BMD(r=0．376， P<0．001)、E2(r=0.227，P=0.013)呈正相关。未发现MGPmRNA与年龄、身高、体重、PTH、Ca、P、β-CTX，P1NP有明显相关性。在骨量正常的绝经后妇女中，在MGP mRNA与其他参数之间没有发现明显的相关性。
　　3、PMOP组血清Fetuin-A、MGP、腰椎BMP2、Runx2 mRNA表达明显低于非骨质疏松组，而腰椎MGPmRNA表达高于非骨质疏松组（P<0.05）；两组间比较，血清BMP2、RUNX2水平、腰椎Fetuin-A mRNA表达没有明显的差异（P>0.05）。多元逻辑回归分析显示，腰椎MGP、BMP2及RUNX2 mRNA表达与BMD相关（分别是OR1.016,95％ CI0.809-0.991,P=0.029；OR1.230,95% CI1.063-1.424,P=0.015；OR1.107,95% CI1.016-1.205,P=0.048）。
　　免疫组织化学结果显示，骨小梁周边的成骨细胞及骨髓基质细胞胞浆均可见Fetuin-A、BMP2、RUNX2、MGP的阳性表达，骨小梁周边的破骨细胞还可见到MGP的阳性表达。与非骨质疏松组相比， PMOP组MGP的光密度值水平较高（P＜0.05）而BMP2和RUNX2水平较低（P＜0.05或P＜0.01）；两组间比较，Fetuin-A光密度值水平差异不明显(P＞0.05）；
　　4、同治疗前相对比，B、C两组都能有效改善患者的临床症状、增加患者腰椎及股骨颈的骨密度、提高血清 Fetuin-A及 MGP的水平（P<0.05），对骨代谢标志物影响不明显（P＞0.05）；其中C组能更快缓解疼痛，且对腰椎骨密度的升高效果更为显著（P<0.01）。与治疗前比较，A组对各项指标影响均不显著（P＞0.05）。
　　结论
　　1、临床与试验研究提示，MGP与PMOP有一定的相关性，而FMC很可能通过影响骨矿化从而影响PMOP的发病；补肾中药治疗PMOP有中医的理论基础，也有现代试验研究的支持。
　　2、低血清MGP mRNA水平可能与PMOP的发病有关，而雌激素参与对血清MGP的调控。
　　3、血清 FMC的合成减少及 MGP在局部骨组织聚集，可能通过影响BMP2/Smad/Runx2信号通路，抑制正常的骨矿化，从而影响PMOP的发生。
　　4、中药淫羊藿能够改善PMOP肾阳亏虚证患者的临床症状，增加BMD，并且其效果跟用药剂量呈相关，其作用机制可能与增加血清FMC的合成有关。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

中英文缩略词表

前言

第一部分 理论研究

1 西医对绝经后骨质疏松症的认识

2 中医对绝经后骨质疏松症的认识

3 中药淫羊藿的药理作用

参考文献

第二部分 基质gla蛋白与绝经后骨质疏松症的相关性研究

前言

1 研究对象的选择

2 指标检测

3 统计学分析

4 结果

5 讨论

参考文献

第三部分 绝经后骨质疏松症患者胎球蛋白A-基质gla蛋白-钙磷矿化复合物的作用机制研究

前言

1 研究对象的选择

2 指标检测

3 统计方法

4 结果

5 讨论

参考文献

第四部分 淫羊藿胶囊治疗绝经后骨质疏松症患者的临床疗效及作用机制研究

前言

1 试验材料

2 临床研究方法

3 统计分析的方法

4 试验结果

5 讨论

参考文献

结语

附录

附录一 综述基质GLA蛋白的临床意义

附录二 试验图片

附录三 研究生在学期间发表论文、科研情况

致谢