电针对帕金森病模型大鼠黑质内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、P62表达的影响研究

摘要

目的：采用颈背部皮下注射鱼藤酮法制备帕金森病(Parkinson’s Disease，PD）模型，观察电针治疗对 PD模型大鼠自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein1 light chain3，LC3-Ⅱ）、P62表达的影响，探讨自噬在针刺防治 PD中的作用。
　　方法：选用SPF级健康雄性SD大鼠120只，体重（180±20）g，适应性喂养1周后可进行分组。8组分别是正常组，模型组，电针治疗7d组，假手术组，电针治疗14d组，电针治疗21d组，电针治疗28d组，电针预治疗组，每组15只。采用颈背部皮下注射鱼藤酮法制备 PD模型，给予鱼藤酮（2mg/kg,溶解于葵花油，浓度2mg/ml，充分混匀并避光保存）颈背部皮下注射，1次/d，连续28d。正常组不做任何处理；假手术组方法同模型组，但只注射不含有鱼藤酮的等量葵花油乳化剂（溶剂）；电针预治疗组首先对正常的大鼠进行电针治疗7d，其后造模。4个电针治疗组模型建立结束之后，根据穴位太冲以及风府，进行电针治疗。选择使用0.5寸毫针进行针刺，接通 G6805电针治疗仪，连续波，频率设为120次/分钟，每次治疗20min，每天1次，疗程分别为7d、14d、21d、28d。其中“风府”为每次固定使用，“太冲”隔天左右交替使用。（1）对各组大鼠进行行为学评分、运用敞箱实验检测各组大鼠水平运动以及垂直运动情况。（2）运用免疫组织化学染色法检测各组大鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase， TH）、α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）阳性表达。（3）运用 RT-PCR法检测各组大鼠中脑黑质区 LC3-ⅡmRNA、P62mRNA表达的变化。（4）运用 Western blot法检测各组大鼠中脑黑质区LC3-Ⅱ、P62蛋白表达的变化。
　　结果：（1）评分结果示：与正常组及假手术组相比,模型组大鼠行为学评分明显升高(P<0.01);与模型组相比,各电针治疗组及电针预治疗组大鼠行为学评分显著降低(均P<0.01)。敞箱实验结果示：模型组的大鼠水平运动、垂直运动活性跟正常组以及假手术组比明显下降(P<0．01)；各电针治疗组及电针预治疗组PD模型大鼠敞箱实验水平运动和垂直运动活性较模型组改善明显(均P<0.01)。
　　（2）免疫组化检测结果示：与正常组及假手术组相比，模型组大鼠黑质内 TH平均光密度值明显降低，α-syn平均光密度值明显增高（均P<0.01）；与模型组相比，各电针治疗组及电针预治疗组大鼠黑质内 TH平均光密度值显著升高，α-syn平均光密度值显著降低（均P<0.01）；正常组及假手术组大鼠黑质内 TH和α-syn平均光密度值无明显差异（P>0.05）。
　　（3）RT-PCR检测结果示:与正常组及假手术组相比,模型组大鼠黑质内LC3-IImRNA、P62mRNA表达显著升高(均 P<0.01);与模型组相比,电针治疗28d组、电针治疗21d组、电针治疗14d组 LC3-IImRNA表达显著升高,P62mRNA表达则显著降低(均 P<0.01),电针预治疗组和电针治疗7d组大鼠黑质内 LC3-IImRNA、P62mRNA表达与模型组相比未见明显差异(均 P>0.05)。
　　（4）Western blot检测结果示：与正常组及假手术组相比，模型组LC3-Ⅱ、P62蛋白表达均明显增加(均P<0.01)。与模型组相比，各电针治疗组及电针预治疗组LC3-Ⅱ蛋白表达水平增加明显，P62蛋白表达有显著下调(均P<0.01)。
　　结论：自噬的激活及功能的正常运作能有效清除细胞内沉积的α-syn，延缓PD的进程。电针治疗可以改善自噬障碍，促使自噬流的正常运行，促进具有细胞毒性作用α-syn的降解，从而可对 DA能神经元发挥着保护作用。

目录

声明

英文缩略词对照表

前言

实验研究

1实验材料

2实验方法

结果

1各组大鼠行为学评分及敞箱实验结果比较

2各组大鼠免疫组化结果比较

3各组大鼠RT-PCR结果比较

4各组大鼠免疫蛋白印迹结果比较

讨论

1帕金森病的中医学认识

2帕金森病的西医学认识

3帕金森病动物模型评价

4选穴依据

5自噬与帕金森病

6 LC3-Ⅱ、P62与自噬

7电针治疗对各组大鼠黑质内LC3-Ⅱ、P62表达的影响

结语

参考文献

综述:自噬-溶酶体途径与帕金森病关系的研究进展

致谢