基于炮制原理的麸炒苍术药效及作用机制研究

摘要

1.目的 在前期研究的基础上，采用药理学及分子生物学技术进一步探讨苍术麸炒前后醇提取物的药理作用差异及关键变化成分的药理作用及信号通路，最终阐明麸炒苍术影响苍术药效的作用机理。 2.方法 2.1苍术炮制前后药效学的比较研究 以湿阻中焦证大鼠为模型。测定各组大鼠小肠推进率及胃内残留率。间苯三酚法测定大鼠血清、尿中D-木糖含量，放射免疫方法检测血清中胃泌素（GAS）、血管加压素（AVP）、血管活性相关肠肽（VIP）、尿中AQP2含量，ELISA法检测胃肠道各部位水通道蛋白的含量。 2.2麸炒苍术提取物对湿阻中焦大鼠结肠MAPK信号通路及AQP3、AQP4表达的影响 采用免疫组化法测定各组大鼠结肠MAPK通路中ERK、p38 MAPK蛋白的表达，RT-PCR法测定各组大鼠结肠MAPK通路中ERK、p38 MAPK mRNA的表达。采用Western blot法测定各组大鼠结肠AQP3、AQP4的蛋白表达， RT-PCR法测定各组大鼠结肠AQP3、AQP4mRNA的表达。 2.3麸炒苍术关键变化成分的作用机制研究 苍术素的作用机制研究，采用放射免疫法测定各组大鼠血清中IL-1、2、6和TNF-α的含量， RT-PCR法测定胃组织MTLR mRNA、空肠组织VIPR2 mRNA的表达，观察大鼠结肠黏膜组织病理学及肠粘膜组织细胞超微结构。5－HMF的作用机制研究，采用放射免疫法检测各组大鼠血浆MTL、SP和SS含量，比色法测定5-HMF对湿阻中焦模型鼠空肠组织ATP含量,免疫组化法测定胃窦平滑肌细胞表皮生长因子受体蛋白(EGFR)和增殖细胞核抗原(PCNA),及大鼠胃黏膜组织中TFF1、结肠组织中c-kit表达量。 3.结果 3.1苍术炮制前后药效学的比较研究 与模型组比较，生苍术与麸炒苍术提取物高、低剂量组的胃内残留率明显下降、小肠推进比明显升高(P＜0.05或P＜0.01),生苍术与麸炒苍术提取物高、低剂量组的血清、尿中D-木糖含量明显升高，AQP2的含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01);血清AVP、GAS含量不同程度升高，VIP含量则不同程度降低(P＜0.05或P＜0.01)；胃、肠AQP2的含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。 3.2麸炒苍术提取物对湿阻中焦大鼠结肠MAPK信号通路及AQP3、AQP4表达的影响 与模型组比较，麸炒苍术提取物组结肠组织ERK及其mRNA的表达的表达显著降低（P＜0.01），结肠组织p38MAPK的蛋白及其mRNA表达显著降低（（P＜0.01）；与麸炒苍术提取物组比较，U0126＋麸炒苍术提取物组和SB203580＋麸炒苍术提取物组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白表达量明显降低（P＜0.05或P＜0.01）,及其 mRNA表达明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。 3.3麸炒苍术关键变化成分的作用机制研究 与模型组比较，苍术素高、中、低剂量组、多潘立酮组大鼠血清细胞因子 IL-1、IL-2、IL-6和TNF-α表达量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)；且各组大鼠胃组织MTLR mRNA相对表达量不同程度升高，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)；苍术素高、中、低剂量组、多潘立酮组大鼠空肠组织VIPR2 mRNA相对表达量不同程度降低，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。模型组大鼠黏膜上皮细胞坏死明显；苍术素高剂量组大鼠肠黏膜、黏膜下层充血水肿轻；模型组大鼠结肠粘膜上皮细胞体积增大,肿胀，出现核浓缩,碎裂,溶解等结构改变；苍术素高剂量组大鼠结肠粘膜上皮细胞体积已基本恢复正常。 与模型组比较，5-HMF高、中、低剂量组、多潘立酮组大鼠血浆MTL、SP和SS含量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)，各组大鼠空肠上皮细胞中的ATP表达不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)，胃窦平滑肌细胞内EGFR的表达量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)，胃窦平滑肌细胞内PCNA表达量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)，胃黏膜腺体细胞胞浆中TFF1的表达量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)，结肠组织中c-kit表达量不同程度升高(P＜0.05或P＜0.01)； 4.结论 4.1苍术炮制前后药效学的比较研究 苍术麸炒品能明显降低模型大鼠胃内残留率并明显增强其小肠推进率，能提高模型大鼠AVP、GAS含量，降低VIP含量，降低大鼠ERKmRNA表达，结果提示苍术麸炒后健脾作用增强。且苍术生品较麸炒品更明显降低模型大鼠尿液中AQP2的含量，提示苍术麸炒后燥湿作用缓和。 4.2麸炒苍术提取物对湿阻中焦大鼠结肠MAPK信号通路及AQP3、AQP4表达的影响 麸炒苍术提取物能明显促进湿阻中焦大鼠结肠AQP3、AQP4的表达；阻断剂SB203580和U0126干预后，麸炒苍术提取物对湿阻中焦大鼠结肠AQP3、AQP4的基因及蛋白表达量明显下降。 4.3麸炒苍术关键变化成分的作用机制研究 苍术素对湿阻中焦证模型大鼠空肠VIPR2基因表达升高明显，胃窦部MTLR基因表达降低明显，说明苍术素能明显纠正VIP2、MTLR基因水平的异常，从病理检测实验结果可以看出，苍术素对湿阻中焦模型大鼠胃肠道器质性的损害亦有很好的恢复作用，这种作用可能是通过对模型大鼠胃肠激素、免疫功能等方面的综合作用而实现的。证明苍术素为苍术健脾作用的成分之一。 5-HMF能够改善模型大鼠胃肠激素及相关细胞因子的表达，从组织到细胞层次改善大鼠胃肠组织结构，说明5-HMF也是苍术麸炒后健脾作用增强的重要的成分之一。

目录

声明

英文缩略词表

前言

文献综述

1中药麸炒的研究现状

2 苍术炮制学研究

3 苍术素及5-HMF干预消化系统相关疾病的药理学研究

4 MAPK信号通路功能及对胃肠相关疾病的调控机制研究

5 湿邪的现代研究

参考文献

第一章 苍术炮制前后药效学的比较研究

1 材料与方法

2 结果

3 小结与讨论

第二章 麸炒苍术醇提物对湿阻中焦大鼠结肠MAPK信号通路及AQP3、AQP4表达的影响

第一节 麸炒苍术醇提取物对湿阻中焦大鼠结肠组织MAPK通路的影响

第二节MAPK信号通路阻断后麸炒苍术醇提物对湿阻中焦大鼠结肠组织AQP3、AQP4表达的影响

第三章 麸炒苍术关键变化成分的作用机制研究

第一节 苍术素的作用机制研究

第二节 5－羟甲基糠醛的作用机制研究

结语与创新

1本课题创新之处

2 存在问题的思考

3 展望

参考文献

学习期间发表的论文

致谢