电针对帕金森病模型大鼠神经营养因子及其受体表达的影响

摘要

目的：目前帕金森病（PD）治疗采用药物替代治疗、外科手术治疗、基因移植治疗等，但由于不能有效阻止或减缓疾病的发展、手术创伤大、移植细胞存活周期短等原因限制了临床运用。近年来，针灸作为一种独特的整体治疗方法，在治疗早期PD方面取得了可喜的成绩，已经被越来越多地运用于PD治疗中。本课题研究电针对帕金森病大鼠旋转行为、黑质谷胱甘肽含量(Glutathione，GSH)、黑质超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxide，GSH-Px)活性、黑质脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase-B，TrkB)表达的影响，探讨电针对PD治疗作用及其作用机理，为针灸临床提供实验依据。 方法： 本课题共用Wistar大鼠90只，随机分为正常组16只、假手术组20只。采用右侧黑质注射微量6-羟基多巴胺(6-hydroxy dopamine，6-OHDA)诱导PD大鼠模型，假手术组注射等体积的生理盐水。造模4周后，腹腔注射阿扑吗啡(Apomorphine，APO)(0.5mg/kg)诱发旋转，记录其30min内的旋转次数，超过7转/min即为成功PD模型，将造模成功的大鼠随机分成两组，即模型组、电针组。电针组取风府穴、太冲穴(双侧)进行治疗，双侧太冲穴用28号0.5寸不锈钢毫针针刺，风府穴用28号1寸不锈钢毫针针刺，接G6805-2型电针治疗仪(右侧太冲穴与风府穴为一对电极)，连续波，频率100Hz，强度1mA，留针15min，每天1次，6天为1疗程，疗程间隔1天，治疗2疗程，治疗结束后进行各指标检测。 1．行为学检测治疗结束后开始行为学检测，给受试大鼠腹腔注射APO(0.5mg/Kg)，以诱发大鼠向健侧(左侧)单向旋转。每次在注射APO15min后开始记录，共记录30min内旋转圈数，每周2次，连续2周。 2．SOD、GSH-Px活性及GSH含量于冰台上分离右侧黑质，称重后用手工匀浆法制成10％组织匀浆，3000r/min离心45min，取上清液，配制成适当的浓度分别测定其相应的值。 3．BDNF表达免疫组化测定采用sABC法。取上述切片，分别作常规免疫组化检测BDNF阳性神经元个数，阳性神经元判断标准：细胞浆呈棕褐色。 4．TrKB表达免疫组化测定采用SABC法。取上述切片，分别作常规免疫组化检测TrKB阳性神经元个数，阳性神经元判断标准：细胞浆呈黄褐色。 5．检测值统计处理的结果用均数±标准差(x±s)表示，SPSS11.0软件包处理。 结果： 1．PD电针组大鼠治疗后较治疗前旋转次数明显减少(P<0.05)，模型组无变化(P>0.05)。 2．PD模型组右侧黑质SOD、GSH、GSH-Px均不同程度低于正常组(P<0.05、P<0.01、P<0.01)，电针使其有不同程度升高(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。 3．PD模型组右侧黑质BDNF明显低于正常组、假手术组(P<0.01)，电针使其含量增加(P<0.05)。 4．PD模型组右侧黑质TrKB明显低于正常组、假手术组(P<0.01)，电针使其含量增加(P<0.05)。 结论： BDNF不仅在中枢神经系统发育过程中对DA神经元的生存、分化、生长和维持神经元正常的生理功能起关键作用，而且还具有抗伤害性刺激，促进神经元损伤后的再生等作用。氧化应激反应在PD发病中起着重要作用，可引起蛋白质、脂质过氧化损害和DNA断裂，导致DA能神经元发生凋亡，引起脑内DA含量减少。本实验证实电针可明显改善PD大鼠的旋转行为，可增强黑质SOD、GSH-Px的活性，增加黑质中BDNF和TrKB的含量，提示电针治疗帕金森病的作用可能是通过以下途径实现： ①增强机体的抗氧化能力，减少自由基生成，减轻脂质过氧化作用，防止DA神经元凋亡。 ②增加黑质中BDNF和TrKB的含量，发挥DA神经元的保护作用，促进神经元损伤后的再生。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

实验一：电针风府穴、太冲穴对帕金森病模型大鼠旋转行为及中脑黑质SOD、GSH、GSH-Px的影响

实验二：电针风府穴、太冲穴对帕金森病模型大鼠中脑黑质BDNF及其受体TrkB的影响

讨论

1.PD动物模型的评价

2.PD发病机理的探讨

2.1现代医学对PD发病机理的研究

2.2祖国医学对PD发病机理的研究

3.电针治疗PD的立论依据

4.电针治疗PD机理探讨

结论

参考文献

综述　神经营养因子与帕金森病

致谢