鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用

摘要

目的： 观察鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用，探讨其对卵巢癌的耐药逆转机制，为鸦胆子油乳的耐药逆转作用应用于临床提供实验依据。 方法： MTT法测定人卵巢癌亲本细胞株A2780和耐药细胞株A2780/DDP对顺铂和鸦胆子油乳的敏感性，计算细胞生长率=实验组吸光度值/对照组吸光度值×100％，实验重复三遍，取平均值，结果以药物浓度为横坐标、以生长率为纵坐标，通过Excel软件绘制药物浓度一生长率曲线，通过IC50计算软件计算出药物作用48h后50％细胞存活的药物浓度(IC50)，耐药指数(RI)=IC50(A2780/DDP)/IC50(A2780)。按照上述方法计算顺铂对两细胞系A2780/DDP及A2780的IC50和RI(未加逆转剂)。同法计算鸦胆子油乳的非毒性剂量IC98。在A2780/DDP中加入浓度为IC98的鸦胆子油乳，培养24h后，接种于96孔板，MTT法测定顺铂对细胞系A2780/DDP的IC50和RI'(加逆转剂)。并计算耐药逆转倍数RI/RI’。FCM检测A2780/DDP凋亡，实验分为四组：空白对照组(空白组)、鸦胆子油乳组(中药组)、顺铂组(西药组)、鸦胆子油乳+顺铂组(中药+西药组)，每个组设3个平行样本，于25cm2的培养瓶中接种1×105个细胞。收集各组处理后的细胞进行固定、染色，流式细胞仪检测细胞凋亡，用Multicycle软件进行分析。 免疫荧光细胞化学法(按试剂盒说明书操作)检测空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用后的A2780/DDP细胞Bc1-2表达变化情况。 western blot法(按试剂盒说明书操作)检测空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用后的A2780/DDP细胞MRP表达变化情况。 结果： 1．鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的生长抑制作用随药物浓度的增加而增强。 2．A2780/DDP经0.02g·L-1鸦胆子油乳预处理24h后，其耐药逆转倍数为5.49倍(5.6/1.02)。说明鸦胆子油乳具有逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP耐药的作用。 3．空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用24h后细胞的凋亡率分别为1.98％、2.11％、3.15％、10.3％，与其它单独组使用药物的耐药细胞相比，鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞凋亡率明显提高。 4．免疫荧光化学法检测各组Bc1-2蛋白表达，与其它单独组使用药物的耐药细胞相比，鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞Bc1-2蛋白表达明显降低，结果表明鸦胆子油乳能降低Bc1-2的表达(P＜0.05)。 5．Western blot法检测各组MRP蛋白表达，与其它单独组使用药物的耐药细胞相比，鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞MRP蛋白表达明显降低，结果表明鸦胆子油乳能降低MRP的表达。 结论： 1．鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP具有耐药逆转作用。 2．鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用的机制可能与其促进耐药细胞的凋亡、下调Bc1-2及MRP蛋白的表达有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文词汇缩略词列表

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

结语

参考文献

附录

综述 鸦胆子油乳诱导肿瘤细胞凋亡及逆转多药耐药的研究进展

论著 鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用

致谢