核糖体失活蛋白基因植物表达载体构建及其对水稻遗传转化的研究

摘要

该研究构建了分别由单子叶植物中启动效率较高的PactI和P2×35s启动子调控的大麦核糖体失活蛋白基因（rip）的植物表达载体,通过农杆菌介导法转化水稻,经PCR检测初步验证了rip基因已导入水稻.同时探讨了影响水稻遗传转化的主要因素,建立了水稻再生和遗传转化体系.主要研究结果如下：1.构建了核糖体失活蛋白基因植物表达载体;2.建立了水稻再生体系;3.建立了农杆菌介导的遗传转化体系;4.获得了转rip基因的PCR阳性杆株.

目录

摘要

Abstract

1.前言

1.1研究的目的及意义

1.2文献综述

1.2.1植物抗真菌病基因工程研究进展

1.2.2核糖体失活蛋白基因及其在植物中的应用

1.2.3水稻遗传转化研究进展

2.材料与方法

2.1核糖体失活蛋白基因植物表达载体的构建

2.1.1试验材料

2.1.2试验方法

2.2水稻再生体系建立

2.2.1试验材料

2.2.2试验方法

2.3农杆菌介导遗传转化

2.3.1试验材料

2.3.2试验方法

2.4转基因植株PCR检测

2.4.1试验材料

2.4.2试验方法

2.5数据统计分析

3.结果与分析

3.1 rip基因植物表达载体构建

3.1.1中间载体pUR构建

3.1.2中间载体pJAR构建

3.1 3植物表达载体pCAR构建

3.1.4植物表达载体p3301RIP构建

3.2水稻再生体系建立

3.2.1水稻成熟胚愈伤组织诱导

3.2.2琼脂及蔗糖浓度对愈伤组织状态的影响

3.2.3不定芽诱导

33农杆菌介导水稻遗传转化体系建立

3.3.1 PPT筛选压力确定

3.3.2 Hyg筛选压力确定

3.3.3影响遗传转化主要因素探讨

3.3.4 rip基因转化水稻

4.讨论

5.结论

6.致谢

参考文献

附录

图版