PRRSV国内分离毒株病毒结构蛋白抗原表位鉴别及其ORF5的RFLP分析

摘要

该研究通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白的抗原性比较及其ORF5和ORF7遗传变异性分析,系统研究了国内分离毒株的抗原特性和遗传学差异.采用IFMA、RT-PCR及RFLP方法对国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白抗原多样性及其ORF5和ORF7的遗传变异性进行了比较研究.主要目的是通过针对GP3、GP5和N蛋白单抗对PRRS分离毒株的抗原表位进行鉴定,比较其抗原性差异,试验结果表明国内PRRSV分离毒株与美洲毒株VR-2332在结构蛋白上有很高的同源性,而与欧洲型毒株LV在抗原上差异较大;利用2套针对PRRSVORF7特异性引物扩增了国内分离毒株的ORF7片段,通过琼脂糖凝胶电泳与欧洲型（A型）、美洲型（B型）PRRSV的ORF7片段比较,证明国内分离毒株的基因型属于美洲型（B型）.在此基础上,扩增各毒株的ORF5基因,用MluⅠ,HincⅡ和SacⅡ限制性内切酶切割ORF5基因,通过这3种限制性内切酶获得了各毒株的ORF5基因限制性酶切图谱,经RFLP分析表明国内分离毒株与美洲型强毒株有着相同的RFLP图谱,而与疫苗毒的RFLP图谱存在明显差异,进一步证明国内分离毒株的基因型属于美洲型的强毒株.由此可见,通过比较分离毒株ORF5的RFLP图谱,可以对PRRSV（B型）强、弱毒进行区分.该研究为分离毒株的抗原特性研究、基因型（血清型）的鉴定及强、弱毒进行区分.该研究为分离毒株的抗原特性研究、基因型（血清型）的鉴定及强、弱毒的鉴别提供了强有力的技术手段.

目录

摘 要

ABSTRACT

前 言

1 PRRS病毒分子生物学

2 PRRS病毒免疫学

3 PRRS疫苗

4 PRRS病毒毒株的遗传变异与抗原多样性

实验一PRRSV国内分离毒株GP3、GP5和N蛋白抗原表位的鉴别

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

实验二PRRSV国内分离毒株基因型的鉴定及其ORF5的RFLP分析

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

结 论

参考文献

致 谢

附录1实验中所用的试剂

附录2试验相关的基因序列

附录3试验相关蛋白的氨基酸序列