青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定及其应用

摘要

青贮饲料是一个复杂的微生物共生体系，主要包括乳酸菌，酵母菌，梭状芽孢杆菌和芽孢杆菌，乙酸菌，霉菌，其中以乳酸菌的数量和种类最多，也是在青贮饲料发酵中起主要作用的微生物，本研究的目的是利用从青贮饲料中分离出的优良乳酸菌青贮玉米，缩短玉米青贮的时间，提高玉米青贮饲料的品质。　　本试验从十二种不同来源的青贮饲料中分离到25株乳酸菌，依据伯杰氏系统细菌学手册的标准和描述，25株乳酸菌都鉴定到了属的水平，有17株乳酸菌鉴定到种的水平，其中玉米乳杆菌(Lactobacilluszeae)2株，布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)4株，短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)4株，戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)3株，干酪乳杆菌(Lactobacilluscaseisubsp.casei)l株，粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)1株，坚强肠球菌(Enterococcusdurans)2株。其余的8株乳酸菌根据本研究的结果还无法确定其种的归属。　　测定这已鉴定的17株乳酸菌的产酸速率。结果发现Lactobacillusbuchneri(Sld2-1)、Lactobacilluszeae(Ssd3)、Enterococcusfaecalis(Shw3-7)和Enterococcusduran(Ssm3-1)都表现出较强的产酸能力。　　利用这四株乳酸菌在实验室进行全株玉米的青贮试验。测定青贮饲料发酵过程中pH值和乳酸菌总菌数的变化，发现添加乳酸菌的各处理组同对照组相比，pH值迅速降低，乳酸菌总菌数迅速增加，2日就达到109CFU/g，玉米青贮30日即可成熟。玉米青贮饲料发酵成熟后进行感官评定以及有机酸和氨态氮的综合评定，结果显示各乳酸菌处理组的青贮饲料品质比对照组显著提高(p＜0.05)。对各处理组的化学分析表明，各乳酸菌处理组的总酸度、粗蛋白含量、乳酸含量和乙酸含量都比对照组显著增加(p＜0.05)，氨态氮、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维以及丁酸的含量都比对照组显著下降(p＜0.05)。在所有处理组中，添加玉米乳杆菌和坚强肠球菌的第4处理组的感官评定得分最高，比对照组提高了30％；乳酸和乙酸含量增加的最显著，比对照组分别提高了75％和45％，丁酸的含量降低的最显著，比对照组减少了67％；总氮含量也增加的最显著，比对照组提高了25％；中性洗涤纤维的含量降低的也最显著，比对照组减少了4％，酸性洗涤纤维含量、酸性洗涤木质素含量和干物质回收率同其它乳酸菌处理组没有显著差异。中试试验结果表明，利用玉米乳杆菌和坚强肠球菌制备的全株玉米青贮饲料30日即可成熟，感官评定得分比对照组提高了15％。此玉米青贮饲料的饲喂试验表明，饲喂添加乳酸菌的玉米青贮饲料能够提高奶牛的产奶量，同时牛乳中蛋白质和非脂乳固体的含量也显著提高(p＜0.05)，而对乳脂肪的含量没有影响。　　由此可见，利用从青贮饲料中分离的性状优良的玉米乳杆菌(Ssd3)和坚强肠球菌(Ssm3-1)制备的全株玉米青贮，不但能够缩短玉米青贮的时间，30日即可发酵成熟，而且还能够显著提高玉米青贮的品质。饲喂此玉米青贮饲料不但能够提高奶牛的产奶量，而且还能够显著提高牛乳中蛋白质和非脂乳固体的含量。

目录

文摘

英文文摘

东北农业大学博士(硕士) 学位论文诚信声明

1引言

1.1文献综述

1.1.1青贮饲料及其微生物组成

1.1.2青贮饲料发酵过程中微生物变化

1.1.3青贮饲料的化学成分

1.1.4青贮饲料国内外研究现状

1.2研究的目的和意义

1.3主要研究内容

2材料与方法

2.1主要材料与设备

2.1.1试验用标准菌株

2.1.2主要试验材料及试剂

2.1.3主要设备

2.2研究方法

2.2.1优质青贮饲料的采样

2.2.2青贮饲料中乳酸菌分离和纯化

2.2.3属的鉴定试验

2.2.4种的鉴定试验

2.2.5优良乳酸菌菌株筛选与确定

2.2.6利用优良乳酸菌进行青贮研究

2.2.7喂饲效果试验研究

2.3统计分析

3结果与讨论

3.1乳酸菌鉴定结果

3.1.1分离菌株生理生化特性研究

3.1.2乳杆菌属种鉴定结果

3.1.3乳球菌属种鉴定结果

3.2性状优良的乳酸菌菌株筛选

3.2.1产酸速率测定

3.2.2生长曲线测定结果

3.3利用乳酸菌进行全株玉米青贮研究

3.3.1发酵过程中乳酸菌的动态

3.3.2发酵过程中pH值的变化

3.3.3不同处理组感官评定结果

3.3.4青贮饲料主要成分分析

3.3.5玉米青贮饲料质量的评定结果小结

3.4喂饲效果试验研究

3.4.1青贮饲料的感官评定

3.4.2对奶牛产奶量及乳成分的影响

4结论

参考文献

附录显微镜下乳酸菌的细胞形态

攻读硕士学位期间发表学术论文

致谢