促性腺激素刺激和成熟培养系统对小鼠GV期卵母细胞体外成熟的影响

摘要

随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁育领域中的应用，人们对卵母细胞体外成熟给予了极大的关注。近年来，哺乳动物卵母细胞体外成熟技术已取得长足的进步。即便如此，某些动物卵母细胞体外成熟率仍然较低，仍存在许多问题没有解决。目前认为，卵母细胞内在的质量(Intrinsic quality)是影响体外成熟卵母细胞发育能力的主要因素，而卵泡来源(follicular origin)决定着卵母细胞内在质量。在本研究中，我们使用。PMSG、hCG模拟FSH、LH，以性未成熟小鼠为动物模型，利用激素刺激、卵母细胞体外成熟、孤雌激活等技术手段，比较系统的研究了卵母细胞来源，不同培养系统对卵丘卵母细胞复合体类型、卵母细胞染色质构型变化以及对卵母细胞体外成熟的影响。以期为未成熟卵母细胞的选择和成熟培养条件的优化提供理论依据。实验结果如下： 1．卵巢刺激可通过提高卵巢中C<'+>型卵母细胞的比例，减少C<'->’型卵母细胞的比例促进卵泡和卵母细胞生长发育。 2．卵巢刺激能显著提高不同类型复合体促进SN卵母细胞的比率。 3．卵巢刺激能增强C<'+>型及C<'->。型卵母细胞细胞核成熟能力,但是对于C<'+/->型卵母细胞，刺激卵巢没有提高其核成熟能力。卵巢刺激能提高所有类型卵母细胞体外成熟和孤雌激活的原核形成率。 4．同单独使用hCG或PMSG相比，PMSG/hCG联合刺激卵巢可以提高体外成熟卵母细胞激活后的原核形成率，但是对于卵母细胞细胞核成熟则没有明显影响。 5．对于从自然周期收集的C<'+>型卵母细胞，诱导成熟和被动成熟的比率没有明显差异，均显著高于自发成熟的比率。而从刺激卵巢收集的卵母细胞，被动和自发成熟的比率没有差异，均低于诱导成熟的比率。从自然周期获得的C<'+/->型卵母细胞，诱导成熟，自发成熟和自发成熟的比率有明显的差异；从卵巢刺激收集的卵母细胞，这三种成熟的比率没有差异。对于C<'->型卵母细胞，对于从自然周期或从卵巢刺激收集的卵母细胞，无论是诱导成熟，还是被动成熟，卵母细胞的核成熟的比率均没有明显影响。 6．对于孤雌刺激反应而言，无论是何种类型的卵母细胞成熟18小时后，自发成熟卵母细胞激活后形成原核的比率高于被动成熟的卵母细胞，诱导成熟的卵母细胞的原核形成率显著低于自发和/或被动成熟的卵母细胞。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1卵母细胞第一次减数分裂阻滞

1.2卵母细胞减数分裂的恢复

1.2.1促性腺激素阻断抑制因子的输入

1.2.2促性腺激素诱导卵丘细胞产生克服抑制物质作用的正因子

1.3影响体外成熟卵母细胞发育能力的因素

1.3.1卵丘卵母细胞复合体类型与卵母细胞发育能力

1.3.2染色质构型与卵母细胞发育能力

1.3.3激素刺激卵巢与卵母细胞发育能力

1.3.4卵母细胞体外成熟培养系统对卵母细胞体外成熟的影响

1.4本实验研究的目的和意义

2材料与方法

2.1主要仪器和设备

2.2主要试剂及配制

2.2.1主要试剂

2.2.2体外操作液的配制

2.2.3活体染液(Hoechst 33342)的配制

2.2.4体外自发成熟培养液的配制

2.2.5体外诱导成熟培养液的配制

2.2.6孤雌激活液的配制

2.3实验动物

2.4卵丘卵母细胞复合体的获取

2.5卵丘卵母细胞复合体的分类

2.6未成熟卵母细胞染色质构型观察

2.7卵母细胞体外的成熟培养

2.8卵母细胞体外成熟检测

2.9孤雌激活

2.10卵母细胞激活的检测

2.11数据处理

3实验结果

3.1卵巢刺激对卵母细胞体外成熟的影响

3.1.1卵巢刺激对不同类型复合体收集率的影响

3.1.2卵巢刺激对卵母细胞染色质构型的影响

3.1.3卵巢刺激对卵丘完整卵母细胞体外成熟的影响

3.1.4卵巢刺激对卵丘不完整卵母细胞体外成熟的影响

3.1.5卵巢刺激对裸卵体外成熟的影响

3.2 PMSG/hCG联合刺激卵巢对卵母细胞体外成熟能力的影响

3.2.1 PMSG/hCG联合刺激卵巢对卵丘完整卵母细胞体外成熟的影响

3.2.2 PMSG/hCG联合刺激对卵丘不完整卵母细胞体外成熟的影响

3.2.3 PMSG/hCG联合刺激对裸卵体外成熟的影响

3.3不同培养方案对卵母细胞体外成熟能力的影响

3.3.1不同培养方案对卵丘完整卵母细胞体外成熟的影响

3.3.2不同培养方案对卵丘不完整卵母细胞体外成熟的影响

3.3.3不同培养方案对裸卵体外成熟的影响

4讨论

4.1卵巢刺激对卵母细胞成熟的影响

4.2 PMSG/hCG联合刺激卵巢对卵母细胞体外成熟能力的影响

4.3不同培养方案对卵母细胞体外成熟能力的影响

5结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文