饲喂瘦肉精猪肌肉microRNA的表达差异及靶基因预测

摘要

microRNAs (miRNAs)是一类长为22nt左右的非编码RNA分子，对生物体的生理功能具有广泛的内源性调节作用。miRNA功能探索和表达分析在模式生物中迅速地进行，miRNA的研究已成为当前生物学领域的热点问题，它们不但在胚胎发育时期表达，在成体中也存在不同的表达情况。盐酸克伦特罗作为β-兴奋剂的一种，在用于改善猪肉品质时有害于人的健康，间接或直接影响到了一些基因从而很大程度上提高了瘦肉率、降低了脂肪率，因此本研究用盐酸克伦特罗处理的香猪肌肉组织研究几种microRNA的差异表达并期望与靶基因建立联系。
　　 本实验首先运用northern bolt方法证明猪骨骼肌中存在miR-1 、miR-133、miR-206、miR-29a、miR-29b、miR-181a、miR-193、miR-195、miR-196a、let-7a、let-7b、miR-26a、miR-30d等13类microRNAs，其中miR-1、miR-133、miR-206的杂交条带明显，miR-181a、miR-193、miR-195等杂交条带很微弱；然后利用real-time PCR方法检测这几种microRNA在骨骼肌组织中的表达情况，结果发现：
　　 1.miR-1、miR-133、miR-206的表达量远高于其他的microRNA，但是在实验组和对照组之间表达没有差异。
　　 2.let-7a、miR-26a在实验组和对照组之间表达差异不明显，但是都表现出随个体月龄增长表达下降的趋势。
　　 3.miR-181a、miR-193、miR-195、miR-196a、miR-30d、let-7b的表达不具有明显的规律性。
　　 4.miR-29a、miR-29b在实验组和对照组之间表达差异显著，且呈相反的规律，即个体中miR-29a、miR-29b的表达情况恰好相反。
　　 5.根据基因芯片的结果，整理出在盐酸克伦特罗的作用下香猪肌肉组织中表达差异的基因，在这些基因中预测上述microRNA 可能存在的靶位点：1）非表达差异的microRNA 可以在这些基因上预测到靶位点；2）表达差异的miR-29a、miR-29b的靶位点有Integrin-linked kinase、Elongation factor 1 alpha、MHC class I antigen、SWI/SNF complex、HnRNP F protein等，可以分析microRNA和靶基因二者对盐酸克伦特罗处理的肌肉组织表型的影响。