利用EST-SSR标记检测黄瓜杂交种子纯度的研究

摘要

种子纯度是种子质量的核心指标，是种子质量分级的主要标准，纯度不高的种子用于生产不但不能增产，反而会给农民带来巨大的经济损失。黄瓜（CucumissativusL.）是葫芦科（Cucurbitaceae）甜瓜属（CucumisL.）一年生草本攀援植物，在我国已有2000多年的栽培历史，是世界主要蔬菜作物之一，在蔬菜生产中占有重要的地位。黄瓜制种过程中，除了母本自交和姊妹交形成的假杂种经常给黄瓜生产造成损失外，不同黄瓜品种种子的混杂也是造成杂交种子纯度降低的一个重要因素。因此，黄瓜种子纯度鉴定方法的研究具有重要意义。
　　 本研究以黄瓜杂交品种哈研808及其亲本、哈研2186及其亲本以及14个杂交品种为实验材料，通过筛选SSR、EST-SSR引物，进行SSR的纯度分析，并以田间形态鉴定为标准，比较鉴定结果，探讨EST-SSR分子标记在黄瓜杂种纯度鉴定中的准确性和可行性。主要研究结果如下：
　　 1.比较模板DNA、Mg2+、dNTPs和Taq酶的不同用量对PCR扩增的影响，建立了适用于黄瓜杂种纯度检测的理想PCR反应体系。
　　 2.根据已发表文献中的黄瓜和其他瓜类的SSR引物合成41对SSR引物，利用上述引物对哈研808及其亲本、哈研2186及其亲本材料进行SSR扩增，结果没有筛选出能区分亲本和目的SSR引物。
　　 3.根据黄瓜EST数据库设计出102对EST-SSR引物，用这些引物对哈研808及其亲本和哈研2186及其亲本材料进行SSR扩增，有2对引物能够区分哈研808及其亲本，但无法区分哈研2186及其亲本。
　　 4.用102对EST-SSR引物对哈研808、哈研2186及其他14个杂交品种共16品种进行SSR扩增，有2对引物能够区分哈研2186和5号材料，并将其余的试验材料分组鉴别。
　　 5.对哈研808品种及其亲本、哈研2186品种及其亲本材料进行田间种植鉴定，判断EST-SSR技术的可靠性和可行性。结果表明SSR分子鉴定与田间形态鉴定结果一致，分子鉴定方法可靠、简单、快捷，通过EST-SSR引物设计能够快捷准确地进行黄瓜杂种品种的纯度鉴定。

目录

文摘

英文文摘

CONTENTS

1 引言

1.1 研究目的和意义

1.2 国内外研究进展

1.2.1 形态鉴定法

1.2.2 物理化学鉴定法

1.2.3 生化标记鉴定法

1.2.4 DNA分子标记鉴定法

1.2.5 SSR引物的开发

1.3 本文研究的主要内容

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 主要试剂

2.2 主要仪器和设备

2.3 方法

2.3.1 分子标鉴定记法

2.3.2 田间种植试验

3 结果与分析

3.1 DNA模板质量

3.2 SSR筛选结果

3.3 EST-SSR筛选结果

3.3.1 引物筛选

3.3.2 F1纯度鉴定的验证

3.4 田间试验结果与分析

3.4.1 田间试验结果

3.4.2 田间试验结果分析

4 讨论

4.1 影响黄瓜杂交种子纯度的原因

4.2 SSR检测黄瓜杂交种子纯度的研究

4.3 FAST-SSR用于杂种纯度检测的可行性

4.4 黄瓜杂种纯度的EST-SSR分析

4.5 哈研808纯度鉴定的分析

4.6 哈研2186纯度鉴定的分析

4.7 本研究的创新点

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文