不同血清学方法检测牛羊布鲁氏菌疫苗免疫抗体消长规律的比较研究

摘要

布氏杆菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌（Brucella）引起的一种人、家畜和多种野生动物共患慢性细菌性传染病。布鲁氏菌是该病病原，主要经过消化道、皮肤粘膜和呼吸道等途径侵入机体而发生感染和发病。布鲁氏菌主要寄生于网状淋巴组织，造成免疫系统病理进程，并常伴随有菌血症，对生殖、神经和骨骼系统造成严重损害。本病呈全球流行具有重要的公共卫生意义，给世界经济造成巨大损失。
　　 疫苗接种是控制布鲁氏菌病流行的重要手段之一，但是疫苗免疫抗体会干扰常规的血清学监测，造成误判结果导致巨大的经济损失。因此，研究各种血清学方法检测疫苗免疫动物后抗体的消长情况对布鲁氏菌病的正确诊断具有很大的价值。
　　 本研究应用S2、S19和M5-90免疫牛，分别在免疫后第1、2、3、4、5和6个月采血，分离血清。将上述血清应用RBPT、SAT、HVRI-cELISA、Idexx-iELISA和Svanova-cELISA方法检测，进行比较研究。应用M5-90、S2免疫羊，在免疫后第1、2、3、4、5和6个月采血，分离血清。
　　 免疫牛检测结果显示：RBPT、SAT、HVRI-cELISA和Svallova-cELISA方法在3种疫苗株免疫后第1个月，阳转率均达到最大，随免疫时间阳性动物数降低。而Idexx-iELISA方法在免疫后第1个月只有免疫S2的牛群阳转率达最高，其余2种疫苗株均晚于1个月。牛群免疫6个月时，接种S2的牛血清应用HVRI-cELISA和Svanova-cELISA方法阳性动物检出率为0，接种S19的牛血清应用Svanova-cELISA和Idexx-iELISA阳性动物检出率为0，接种M5-90的牛5种方法的阳性动物检出率均不为0，需要稍长时间的监测。比较分析结果显示：HVRI-cELISA与Svanova-cELISA检测S19免疫牛群的符合率最高（k=0.927），检测S2和M5=90虽然低于S19，但k值也都超过了0.75，具有很好的符合率。
　　 免疫羊检测结果显示：RBPT、SAT、HVRI-cELISA和svanova-cELISA方法在M5-90和S2疫苗株免疫后第1个月动物阳转率达到最大。当HVR-cELISA应用32％作为临界值时阳性动物检出率与Svanova-cELISA方法差异不显著（p>0.05），且在免疫第6个月时阳性检出率为0。

目录

文摘

英文文摘

Contents

1 引言

1.1 布鲁氏菌病的概况

1.2 布鲁氏菌病的病原学

1.2.1 形态及染色特性

1.2.2 培养及生化特性

1.2.3 布鲁氏菌种和生物型

1.2.4 布鲁氏菌的抵抗力和致病力

1.3 布鲁氏菌病国内外疫情流行情况

1.4 布鲁氏菌病的流行病学

1.4.1 牛种布鲁氏菌及牛布鲁氏菌

1.4.2 羊种布鲁氏菌及绵羊和山羊布鲁氏菌病

1.4.3 猪种布鲁氏菌及猪布鲁氏菌病

1.4.4 绵羊种布鲁氏菌及绵羊附睾炎

1.4.5 其他布鲁氏菌及布鲁氏菌病

1.5 布鲁氏菌病疫苗的研究进展

1.5.1 人用菌苗

1.5.2 畜用疫苗

1.6 布鲁氏菌病检测方法的研究进展

1.6.1 病原学诊断

1.6.2 免疫学诊断

1.7 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 试剂

2.1.2 仪器

2.1.3 菌株和细胞

2.1.4 实验动物

2.1.5 实验血清样品

2.2 方法

2.2.1 HVRI-cELISA操作步骤

2.2.2 HVRI-cELISA检测羊血清临界值的确定

2.2.3 免疫布鲁氏菌病阴性牛及血清收集

2.2.4 免疫布鲁氏菌阴性绵羊和山羊及血清收集

2.2.5 布鲁氏菌病虎红平板凝集试验（RBPT）

2.2.6 布鲁氏菌病试管凝集试验（SAT）

2.2.7 瑞典Svanova-cELISA操作步骤

2.2.8 Idexx-iELISA操作步骤

2.2.9 原始数据统计分析

3 结果

3.1 5种血清学方法检测疫苗株免疫牛的结果

3.1.1 各种血清学方法检测S2免疫牛群血清样品

3.1.2 各种血清学方法检测S19免疫牛群血清样品

3.1.3 各种血清学方法检测M5-90免疫牛群血清样品

3.1.4 各种血清学方法之间比较分析

3.1.5 免疫牛各时期血清的抗体阻断率

3.2 HVRI-cELISA检测羊血清临界值的确定

3.3 几种血清学方法检测疫苗免疫羊的结果比较

3.3.1 各种血清学方法检测M5-90免疫羊血清样品的结果

3.3.2 各种血清学方法检测S2免疫羊血清样品的结果

3.3.3 免疫羊群血清的抗体阻断率（PI值）

4 讨论

4.1 比较5种血清学方法检测布鲁氏菌疫苗免疫牛

4.2 HVRI-cELISA应用于检测羊布鲁氏菌病的临界值的确定

4.3 比较4种血清学方法检测布鲁氏菌疫苗免疫羊

5 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文