2010年中国鸡传染性支气管炎病毒分子流行病学分析

摘要

本课题组通过对2010年从我国216个鸡场采集的疑似感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的鸡病料样品进行病毒分离,同时用电子显微镜形态学观察、鸡胚致病性试验、SPF鸡红细胞凝集特性试验等生物学特性研究以及核蛋白RT-PCR方法进行鉴定,分离得到56株鸡传染性支气管炎病毒。在此基础上,通过RT-PCR方法扩增各个IBVS1基因,分别连接至pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞中,克隆后鉴定阳性质粒并进行序列测定,运用序列分析软件对测得的序列进行拼接比对并构建系统进化树,进而分析各病毒株的亲缘关系。
　　 本实验分离到IBV共56株,对分离株与选定的19株参考株S1基因核苷酸与推导氨基酸序列比对分析,发现其中33株病毒株属于LX4型第Ⅰ亚型,18株病毒株属于LX4型第Ⅱ亚型,这一结果表明LX4型病毒株仍为我国IBV主要流行基因型,并可能逐渐演化成2个不同的亚型,且每个亚型内的病毒株在S蛋白S1亚基的不同位置都有其各自的偏嗜氨基酸残基,我们推断不同亚型病毒株可能具有不同的进化过程。
　　 对IBVLX4型与tl/CH/LDT3/03型分离株S1基因进行单碱基比对分析,发现分离株ck/CH/LSD/100408S1基因为不同病毒株发生重组而得的同源嵌合体。Ck/CH/LSD/100408很可能是LX4样和tl/CH/LDT3/03样的病毒株在共同感染鸡体,发生自然重组而产生。Ck/CtULSD/100408为我国首次发现的LX4型与tl/CH/LDT3/03型病毒株发生自然重组而产生的新变异株。
　　 本研究在Mass型疫苗免疫鸡群中分离到Mass型IB病毒。序列分析发现分离株ck/CH/LDL/101212与疫苗株H120相比仅在距离S1基因起始密码子56个核苷酸位置出现1处无义突变,ck/CH/LDL/101212与现有Mass型疫苗具有很近的亲缘关系,推测为免疫的鸡群中疫苗的再分离。同样从Mass型疫苗免疫鸡群内分离到的ck/CH/LHLJ/100902与致病型M41具有较近的亲缘关系,ck/CH/LMLJ/100902与之相比S1基因仅有3处氨基酸置换。
　　 本研究着重探讨近年来TaiwanⅡ型(TW-Ⅱ)毒株在我国内陆地区的分离与鉴定。通过与台湾地区分离株全基因序列的比对,我们发现我国内陆分离到的TW-Ⅱ型分离株在基因组中存在缺失和突变。ck/CH/LHB/100801病毒动物回归试验结果表明,ck/CH/LHB/100801对SPF鸡具有较低的致病力。SPF鸡接种ck/CH/LMB/100801后血清抗体阳转情况与强致病性毒株ck/CH/LDL/091022相似,却不同于弱毒疫苗株H120。Ck/CH/LHB/1008013'非编码区(UTR)内出现49bp碱基缺失与TW2296/95鸡胚传代致弱株该位置的碱基缺失相同。这一试验结果表明我国内陆地区分离到的TW-Ⅱ型分离株与鸡胚传代致弱株TW2296/95具有很近的亲缘关系。
　　 本研究结果表明IBV仍然是影响我国养鸡业的重要病毒性传染病,大规模、高密度的饲养方式和疫苗的广泛使用大大加快了新型病毒出现的速度,因而对IBV实施实时动态监控十分必要。