甘蓝黑斑病病原菌鉴定与抗源材料筛选

摘要

甘蓝黑斑病(Alternaria oleracea)是十字花科蔬菜最常见的病害，也是一种世界性病害，为害严重，仅次于软腐病、霜霉病和病毒病三大病害，最早于1836年在甘蓝上发现。为加快甘蓝抗黑斑病的新品种选育和种质创新步伐，方便、快捷、准确的鉴定种质资源抗病性就成为迫切需要解决的问题。
　　 本研究从病原菌鉴定入手，对引起甘蓝黑斑病链格孢属真菌的鉴定主要采取ITS序列比对的分子生物学方法与传统形态分类学相结合的手段，并在甘蓝生产区黑斑病菌采集分离鉴定的基础上，试验采用致病力强的黑斑病病菌株做菌源，并且对甘蓝黑斑病病原菌的生物学特性进行研究；筛选出了一套简便易行的甘蓝黑斑病苗期抗性鉴定方法；以此为基础，对东北农业大学园艺学院甘蓝育种研究室的20份甘蓝材料进行苗期黑斑病抗性鉴定，为今后的甘蓝抗黑斑病育种工作奠定坚实的理论和实践基础，主要研究结果如下：
　　 1.对最近在甘蓝生产区采集的疑似甘蓝黑斑病病菌样本进行分离、纯化、鉴定，应用传统形态分类学方法和分子生物学手段相结合对属于链格孢属真菌的黑斑病菌进行了鉴定，借助分子标记的新方法，快速准确地鉴定病原真菌，建立了一套简单易行的分离鉴定技术。认为得到的病株即为甘蓝黑斑病病菌。
　　 2.明确了甘蓝黑斑病菌的基本生物学特性：适应甘蓝黑斑病菌生长的培养基是PSA；甘蓝黑斑病菌菌丝生长和产孢的最适宜pH值为7；最适宜温度是23℃；最适宜氮源为硝酸铵；最适宜碳源为淀粉；黑暗有利于甘蓝黑斑病菌的生长和产孢。
　　 3.以根颈部发病症状作为分级标准，并在前人确定的病情分级标准的基础上进一步进行细致的分析和完善，根据不同病害发生的严重性制定了甘蓝黑斑病病害的病情分级标准和抗源群体抗病性划分标准。
　　 4.建立了一套甘蓝抗链格孢黑斑病的人工接种鉴定方法。试验利用甘蓝自交系“W14”并以分离、纯化和鉴定出的甘蓝黑斑病菌株“Bs1”为试材，采用正交试验设计方法研究了甘蓝黑斑病苗期抗病鉴定技术。试验筛选出甘蓝黑斑病苗期接种鉴定方法的最佳组合：最适接种方法为针刺根茎法，接种浓度为106个孢子·mL-1，接种苗龄为4叶期。
　　 5.应用筛选出的人工接种鉴定方法对东北农业大学甘蓝课题组提供的20份甘蓝材料进行黑斑病苗期抗性鉴定。抗源筛选结果为抗病(R)的材料1份，中抗的材料(MR)的材料8份，感病(S)的材料11份。