榨菜离体培养体系建立及秋水仙素诱导多倍体的研究

摘要

本研究以4个榨菜(Brassica juneea Czern.et Coss.var.tumida)株系B2-1014，B2-1020，BZ⊕-1005，BZ⊕-1003为材料，利用榨菜离体培养及实生苗处理诱导多倍体的方法，对影响榨菜离体植株再生及秋水仙素诱导多倍体影响因素进行了研究，初步建立了榨菜的多倍体诱导方法。同时对游离小孢子培养诱导胚状体进行了初步的研究，为下一步研究诱导单倍体植株，并进行加倍得到榨菜二倍体植株打下了基础。研究结果如下：
　　 ⑴通过对榨菜4个株系的茎尖及下胚轴进行离体培养，均能成功诱导出愈伤组织，其中以榨菜株系B2-1014诱导率最高，为49.0％，利刚愈伤组织诱导率高的株系B2-1014进行离体培养，筛选出其最佳再生培养基组合：愈伤组织诱导培养基(MS+0.5mg/L6-BA+0.8mg/LNAA)；不定芽诱导培养基(MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA)；不定根诱导的培养基(MS+0.2 mg/LNAA)。下胚轴与茎尖最佳再生培养基组合相同，但其诱导效果不同，茎尖离体培养：愈伤组织的诱导率达95.6％，不定芽再生率达95.6％，生根率达100％；下胚轴离体培养：愈伤组织的诱导率达90.0％，不定芽再生率达92.2％，生根率达97.8％。不同苗龄对榨菜再生频率呈显著性影响，以茎尖做外植体，其苗龄为5 d时分化能力最强，下胚轴则是4 d。
　　 ⑵通过组织培养利实生苗处理诱导榨菜多倍体均能获得四倍体植株，不同的处理方式、处理条件可以产生不同的诱导效果。在组织培养中，以株系B2-1014进行诱导，茎尖为外植体、秋水仙素浓度0.4％、培养48 h时四倍体诱导效果最好，为30％；在相同条件下，下胚轴为外植体，四倍体诱变率为15.6％。利用实生苗处理进行榨菜多倍体诱导，以点滴生长点(2.0g/L)和浸根(40 mg/L处理时间3d)同时处理四倍体诱变率最高，为14.4％，灌根处理(40 mg/L，处理时间3d)四倍体诱变率最低，为7.8％：榨菜不同株系多倍体的诱变率不同，4种材料中以榨菜株系B2-1014四倍体诱导效果最好，显著高于其他株系。不同处理方法的最适苗龄相同，3片叶的四倍体诱变率最高。
　　 ⑶对榨菜4个株系进行游离小孢子培养中，不同株系、不同基本培养基其胚状体诱导率不同。在不同株系与基本培养基的组合中，B2-1014在1/2NLN基本培养基中的胚状体诱导效果最好，诱导率为31.1％。而同样采剧1/2NLN基本培养基，B2-1020，BZ⊕-1005，BZ⊕-1003的胚状体诱导率分别为8.9％，5.6％和4.4％。