哈尔滨地区猪源致病性大肠杆菌耐药性分析及基因分型研究

摘要

大肠杆菌病是兽医临床上常见的疾病之一，在养猪业中其主要危害包括仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病等，造成了巨大的损失。随着抗菌药物在畜牧业中的广泛及不规范使用，细菌的耐药性特别是多重耐药性问题日趋严重。
　　 与发达国家相比，我国大肠杆菌的耐药形式更为严峻，国内围绕大肠杆菌耐药性也做了不少研究，但多数停留在耐药性和耐药基因的检测上，对致病性大肠杆菌质粒的分析及不同地区致病性大肠杆菌的遗传相关性缺乏深入的、全面的认识。哈尔滨地区猪源致病性多重耐药大肠杆菌的流行、危害以及不同地区多重耐药性大肠杆菌的遗传相关性未见相关报道。
　　 本试验依据CLSI(2007)推荐的纸片扩散法检测了48株分离自规模化养猪场的致病性大肠杆菌对14种常用抗菌药物的耐药性，分析比较致病性大肠杆菌对各种抗菌药物的多重耐药情况和耐药率。试验结果表明:48株致病性大肠杆菌均表现为多重耐药;多重耐药菌株主要表现为3～12耐，对复方新诺明、氟苯尼考的耐药率高达89％以上，对多西环素、链霉素、链霉素、氯霉素、恩诺沙星、庆大霉素、阿莫西林/克拉维酸的耐药率都超过了50％，对阿米卡星、磷霉素、多粘菌素B相对敏感，磷霉素和多粘菌素B的耐药率仅仅只有2.1％和0。
　　 对48株大肠杆菌菌株进行了质粒图谱分析，通过碱式裂解法小量提取质粒，然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析，并用HindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析。结果表明:质粒获得率为100％，来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱，具有一定的遗传相关性，而来源不同的菌株的质粒图谱一般不同，属于不同克隆。
　　 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对48株猪源致病性多重耐药大肠杆菌进行分型研究，并将其结果与耐药表型和质粒图谱结果相比较。结果表明:48株大肠杆菌共可分为18个PFGE型别，大多数型别又可分为不同亚型。同一养殖场不同耐药表型的菌株和质粒图谱的菌株都存在PFGE图谱完全相同的现象，通过对质粒图谱和脉冲场凝胶电泳图谱的结果分析可以发现:分离自哈尔滨周边地区同一发病养猪场的大肠杆菌具有一定的遗传相关性，可能存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播。试验结果还表明耐药表型、质粒图谱、脉冲场凝胶电泳图谱并不是完全对应关系。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 文献综述

1．1．1 大肠杆菌的危害

1．1．2 大肠杆菌耐药现状

1．1．3 大肠杆菌的分型方法

1．2 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 菌株

2．1．2 试验试剂

2．1．3 主要试剂的配制

2．1．4 主要仪器与设备

2．1．5 实验试剂的配制

2．2 试验方法

2．2．1 大肠杆菌的分离

2．2．2 致病性大肠杆菌的鉴定

2．2．3 大肠杆菌体外药敏性试验

2．2．4 大肠杆菌质粒的提取与酶切

2．2．5 多重耐药大肠杆菌脉冲场凝胶电泳分析

3 试验结果

3．1 大肠杆菌的分离鉴定

3．1．1 大肠杆菌分离情况

3．1．2 大肠杆菌生化鉴定

3．1．3 大肠杆菌致病性试验

3．2 大肠杆菌药敏试验结果

3．3 质粒指纹图谱结果

3．4 质粒酶切分析

3．5 脉冲场凝胶电泳结果

4 讨论

4．1 猪源致病性大肠杆菌的耐药性分析

4．2 质粒图谱分析

4．3 脉冲场凝胶电泳分析

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文