槲皮素抑菌作用的体内和体外研究

摘要

本试验选取240只健康、生产性能相近的39周龄海赛白壳蛋鸡随机分4组，每组6个重复，每个重复10只鸡，试验8周。对照组饲喂基础饲粮，3个试验组分别在基础饲粮中添加槲皮素(quercetin)0.02％，0.04％和0.06％，选取大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、粪链球菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、肠球菌作为体外试验受试菌株，采用牛津杯方法进行试验。研究槲皮素对8种禽类易感染细菌的体内和体外抑制作用及机制，为探求槲皮素作为改善蛋鸡肠道内环境和减少禽类易感染疾病发生的新型饲料添加剂提供理论依据，以便更好地指导生产实践。本研究包括以下4部分:
　　(1)槲皮素对蛋鸡盲肠肠道菌群的影响
　　与对照组相比，试验组2和3大肠杆菌菌落总数极显著降低(P＜0.01)。3个试验组金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、粪链球菌、肠球菌总数均显著降低(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01、P＜0.05);3个试验组乳酸杆菌菌落总数有升高趋势(P=0.072);3个试验组双歧杆菌菌落总数显著提高(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05)。
　　(2)槲皮素对8种禽类易感染细菌的体外抑制作用
　　随着槲皮素浓度的增加，各受试菌株的抑菌圈直径极显著增加(P＜0.01)。大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌属革兰氏阴性菌(G-)，金黄色葡萄球菌、粪链球菌、肠球菌属革兰氏阳性菌(G+)，综合受试菌株的最小抑菌浓度(MIC)和抑菌圈直径的试验结果可知，槲皮素对G-杆菌的抑菌效果更好，G-杆菌对槲皮素的敏感度较高。
　　(3)槲皮素和抗生素的抑菌效果比较
　　将特异性抗生素作为阳性对照，针对槲皮素的不同浓度和抑菌圈做回归曲线，结果表明，各受试菌株达到MIC时抑菌圈直径所需的抗生素浓度均高于MIC，且抗生素的浓度不相同。
　　(4)槲皮素对4种禽类易感染细菌的体外抑菌机制
　　与对照组相比，槲皮素可影响受试菌株的超微结构，使受试菌株结构完整性和胞膜受损，细菌胞浆内容物渗漏，最终细菌空化死亡。槲皮素作用于受试菌株后，粪链球菌胞外渗出的碱性磷酸酶(AKP)量随着槲皮素添加量的增加呈上升趋势（P=0.069），其他三种受试菌株胞外渗出的AKP量极显著增加(P＜0.01)。随着槲皮素添加量的增加，受试菌株菌液中β-半乳糖苷酶含量、可溶性蛋白浓度、ATP酶活性（大肠杆菌除外）均极显著增加（P＜0.01）。
　　综上所述，适宜剂量槲皮素可以通过提高蛋鸡肠道有益菌群（双歧杆菌）菌落总数，降低有害菌群（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、粪链球菌、肠球菌）菌落总数发挥体内抑菌作用。在体外，适宜剂量槲皮素通过影响细胞壁和细胞膜发挥抑菌作用。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 禽类感染性疾病的治疗现状

1．2 槲皮素的研究进展

1．2．1 槲皮素概述

1．2．2 槲皮素的生理功能

1．3 槲皮素抑菌作用的研究进展

1．3．1 槲皮素抑菌作用的研究

1．3．2 槲皮素的抑菌机制

1．3．3 槲皮素抑菌活性的测定

1．4 研究目的及意义

2 材料与方法

2．1 试验材料(槲皮素的体内抑菌试验)

2．2 试验设计与试验饲粮

2．2．1 试验设计

2．2．2 试验饲粮

2．3 饲养管理

2．4 指标测定方法

2．4．1 肠道主要菌群的测定

2．5 槲皮素的体外抑菌试验(牛津杯法)

2．5．1 试验仪器

2．5．2 试验菌株

2．5．3 试验设计

2．5．4 试验方法

2．6 槲皮素的体外抑菌机制试验

2．6．1 试验菌株

2．6．2 试验设计

2．7 数据分析

3 结果与分析

3．1 槲皮素对蛋鸡盲肠肠道菌群的影响

3．2 槲皮素对8种禽类易感染细菌的体外抑菌作用

3．2．1 接种菌液的浓度对槲皮素体外抑菌作用的影响

3．2．2 槲皮素对受试菌株的体外抑制作用

3．2．3 槲皮素和抗生素的抑菌效果比较

3．3 槲皮素对4种禽类易感染细菌的体外抑菌机制

3．3．1 槲皮素对受试菌株细胞壁和细胞膜结构的影响

3．3．2 槲皮素对受试菌株细胞壁和细胞膜通透性的影响

4 讨论

4．1 槲皮素对蛋鸡肠道菌群的影响

4．1．1 槲皮素对肠道有害菌群的影响

4．1．2 槲皮素对肠道乳酸杆菌和双歧杆菌的影响

4．2 槲皮素对禽类易感染细菌体外抑菌作用的影响

4．2．1 槲皮素对受试菌株的体外抑制作用

4．2．2 槲皮素和抗生素的抑菌效果比较

4．3 槲皮素对禽类易感染细菌的体外抑菌机制

4．3．1 槲皮素对受试菌株细胞壁和细胞膜结构的影响

4．3．2 槲皮素对受试菌株细胞壁和细胞膜通透性的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文