肉鸡日粮硒含量调查及缺硒对中性粒细胞功能的影响

摘要

硒缺乏可导致畜禽和人类多种疾病的发生，而饲料缺硒是畜禽发生缺硒病的主要原因。目前养殖户使用的肉鸡日粮多采用预混料配以能量饲料（玉米）和/或蛋白饲料（豆粕）制成。由于生产厂家不同，预混料中硒含量水平不一。玉米和豆粕的产地差异，也造成了硒含量的巨大差异。因此，生产中常常由于原料检测技术原因，造成日粮硒含量绝对或相对缺乏。日粮硒缺乏，不仅可以引起肉鸡白肌病、渗出性素质和胰腺萎缩等，免疫功能低下也是缺硒的主要临床表现。为明确哈尔滨市肉鸡预混料硒含量情况，阐明低硒对肉鸡中性粒细胞功能的影响。本试验调查了哈尔滨市市场11种主要品牌肉鸡预混料硒含量和黑龙江省9个玉米和豆粕生产大县的玉米和豆粕硒含量，在人工复制肉鸡缺硒模型基础上，分离35日龄肉鸡外周血中性粒细胞，应用实时荧光定量PCR法检测了24种硒蛋白、细胞因子（IL-1α、IL-1γ、IL-2、IL-4、 IL-6、 IL-7、 IL-10、IL-12α、IFN-γ和TGF-β4）、热休克蛋白(Hsp90、Hsp70、Hsp60、Hsp40和Hsp27)和炎症因子（COX-2、iNOS、TNF-α、NF-κB和PTGEs)mRNA表达量，免疫印迹法检测热休克蛋白（Hsp90、Hsp70和Hsp60）蛋白含量，结果表明:
　　(1)所检预混料含硒量有一个不符合国家标准，当与缺硒地区来源的能量饲料和蛋白饲料进行配料时，可能造成日粮硒缺乏，影响养殖业的经济效益，故应适量添加硒制剂使饲料达到标准。
　　(2)缺硒组肉鸡中性粒细胞细胞因子IL-1β、IL-1γ、IL-6和IL-7表达量增加，IL-2、IL-4、IL-10、IL-12β、IFN-γ和TGF-β4表达量降低，表明缺硒可通过调控细胞因子的表达，改变中性粒细胞的功能。
　　(3)缺硒对35日龄肉鸡中性粒细胞热休克蛋白Hsp90、Hsp70、Hsp60、Hsp40和Hsp27表达整体呈上升趋势，但是Hsp40的表达量增加最多，表明缺硒条件下，Hsp40在中性粒细胞免疫功能可能发挥主要作用。
　　(4)缺硒能提高35日龄肉鸡中性粒细胞炎症因子COX-2、iNOS、TNF-α、NF-κB和PTGEs的表达量，以PTGEs、iNOS和TNF-α表达量增加的较为明显，提示炎性损伤是缺硒导致中性粒细胞功能障碍的机制之一。
　　(5)缺硒下调35日龄肉鸡中性粒细胞24种硒蛋白的mRNA表达，但是不同硒蛋白的下降程度略有不同，Gpx2、Gpx3显著降低，TrxR3、Dio3、SelK下降不明显，可能与其功能不同相关。
　　综上所述，饲料硒含量不足可引起肉鸡硒缺乏，硒缺乏可引起肉鸡中性粒细胞细胞因子、热休克蛋白、炎症因子、24种硒蛋白表达量发生改变，提示硒缺乏可引起中性粒细胞免疫功能障碍。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 畜禽硒缺乏的现状

1．1．1 畜禽硒缺乏症的流行病学

1．1．2 畜禽硒缺乏症的病因现状

1．2 缺硒对鸡免疫功能的影响

1．2．1 缺硒对鸡免疫器官的影响

1．2．2 缺硒对细胞免疫的影响

1．2．3 缺硒对体液免疫的影响

1．3 缺硒致免疫功能低下机制的研究进展

1．3．1 氧化应激与细胞免疫

1．3．2 热休克蛋白与细胞免疫

1．3．3 炎症因子与细胞免疫

1．4 研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 药品试剂

2．2 仪器设备

2．3 试验设计

2．3．1 预混料、豆粕和玉米的采集

2．3．2 试验动物分组与样品采集

2．4 检测内容与方法

2．4．1 硒含量的测定

2．4．2 总RNA的提取

2．4．3 总RNA反转录成cDNA

2．4．4 中性粒细胞中细胞因子相关基因mRNA表达的检测方法

2．4．5 中性粒细胞中热休克蛋白(Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90)mRNA表达的检测方法

2．4．6 中性粒细胞中炎症因子(TNF-α、iNOS、PTGES、NF-κB和COX-2)mRNA表达的检测方法

2．4．7 中性粒细胞中24种相关硒蛋白mRNA表达的检测方法

2．4．8 中性粒细胞Hsp60、Hsp70和Hsp90蛋白含量的检测方法

2．5 试验数据的统计与分析

3 结果与分析

3．1 饲料硒含量调查的结果

3．2 缺硒对鸡中性粒细胞细胞因子mRNA表达影响的检测结果

3．3 缺硒对鸡中性粒细胞Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp27表达影响的检测结果

3．3．1 缺硒对鸡中性粒细胞Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp27mRNA表达影响的检测结果

3．3．2 缺硒对鸡中性粒细胞Hsp60、Hsp70和Hsp90蛋白表达影响的检测结果

3．4 缺硒对鸡中性粒细胞炎症因子mRNA表达影响的检测结果

3．5 缺硒对鸡中性粒细胞24种硒蛋白mRNA表达影响的检测结果

4 讨论

4．1 肉鸡日粮缺硒的原因

4．2 缺硒对肉鸡中性粒细胞中细胞因子的影响

4．3 缺硒对肉鸡中性粒细胞中热休克蛋白的影响

4．4 缺硒对肉鸡中性粒细胞中炎症因子的影响

4．5 缺硒对肉鸡中性粒细胞中硒蛋白的影响

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文