马急性蹄叶炎下基质金属蛋白酶变化的研究

摘要

本试验研究全身循环系统中的基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、集硅酶-1、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一种基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)在低聚果糖诱导的急性蹄叶炎模型中的浓度变化趋势，试图探讨其在蹄叶炎发生发展过程中的作用，为急性蹄叶炎早期快速诊断及预警提供理论基础和技术标准。
　　将21匹马随机分为实验组(n=12)和对照组(n=9)，把10g/kg体重的低聚果糖溶解在6L蒸馏水中，用鼻胃管给试验组的马灌服，同时，给对照组灌服6L蒸馏水。从0h到72h期间，每隔四个小时用抗凝采血管采集静脉血5ml，将收集的血液3000r/min离心10分钟，分离血浆，保存在-80℃。用酶联免疫吸附试验测量各生物指标。每次采血后都对体况和跛行程度进行检查。在跛行达到三级的时候对蹄部拍摄X光片。将一匹跛行程度达到3级的马处死，取其蹄部，从蹄部纵轴剖开，小心去掉其第三指骨，暴露蹄叶层，将蹄叶层小心剥离蹄壳，马蹄叶层本身大约0.2cm厚，只需将其切成2.0cm×2.0cm的小块，放入福尔马林溶液中保存。
　　12匹试验组的马，有11匹表现出跛行症状。对照组没有马在试验期间表现出跛行。灌服低聚果糖后8-20h，试验组相继出现一级跛行症状;20-56h期间相继出现二级跛行症状，个别表现出三级跛行的症状。另外，体温最低在0h，是37.6±0.2℃，最高出现在40h，是39.3±0.8℃。在二级跛行出现期间，呼吸率从17.4±1.8次/min增加到25±2.8次/min，同时，心率从49±2.1次/min增加到64±4.2次/min。所有灌服低聚果糖的马在12-24h期间均相继出现腹泻的症状，临床症状严重的马还表现出羞明流泪和明显的酸中毒症状。所有临床症状均在60h后缓解。实验组中的MMP-1、MMP-2、MMP-9、集硅酶-1、P38 MAPK和TNF-α均表现为先升高，而TIMP-2则变现出下降的趋势，各指标在68h后均恢复到对照组水平。MMP-1的浓度在12h开始显著升高，一直持续到28h，在24h出现峰值，峰值为37.96±4.91ng/ml，与对照组相比差异性显著(P＜0.05)，在32h后回落;MMP-2的浓度变化趋势整体呈现波浪式，在8h达到峰值，为21.44±3.06ng/ml，且与对照组相比差异显著（P＜0.05）;MMP-9的浓度在8h开始显著升高，持续到48h，时峰值出现在28h，为199.37±25.39ng/ml，与对照组比较差异性显著(P＜0.05); TIMP-2的浓度整体呈现下降的趋势，从第8h一直持续到64h，并在16h达到最低值，36.40±4.53ng/ml，与对照组相比差异显著（P＜0.05）;集硅酶-1的浓度在16h开始显著升高，持续到56 h，在48 h出现峰值，峰值为15.11±1.50 ng/ml，与对照组比较差异性显著(P＜0.05); P38MAPK的浓度变化趋势大体上是先升高后降低，从第8h开始升高，一直持续到68h，在16h达到峰值46.44±10.36ng/ml，与对照组比较差异性显著(P＜0.05); TNF-α的浓度变化趋势仅出现一个峰，从16h一直持续到28h，在24h处出现峰值150.15±13.19ng/ml，与对照组相比差异性显著（P＜0.05）。
　　结果表明，低聚果糖诱导的急性蹄叶炎模型中，血液MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、集硅酶-1、P38 MAPK和TNF-α的浓度变化趋势符合蹄叶炎发病变化趋势;MMP-2在低聚果糖诱导的急性蹄叶炎模型中起到重要作用，有潜在诊断价值;在低聚果糖诱导的急性蹄叶炎模型中，P38MAPK总体上起到促进作用。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 马蹄叶炎概述

1．1．1 马蹄叶炎的病因

1．1．2 马蹄叶炎的造模方法

1．2 马蹄叶炎研究进展

1．2．1 马代谢综合征与蹄叶炎

1．2．2 垂体中间部功能障碍与蹄叶炎

1．3 基质金属蛋白酶

1．4 试验的目的和意义

2 材料和方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验器材

2．1．3 实验药品和试剂

2．2 实验方法

2．2．1 实验动物分组

2．2．2 模型建立

2．2．3 样本采集

2．2．4 酶联免疫吸附试验

2．2．5 组织学检查

2．3 数据统计分析方法

3 结果

3．1 临床症状

3．2 X光检查结果

3．3 相关指标测定结果

3．4 组织形态学评价

3．4．1 蹄叶层组织形态改变

3．4．2 有丝分裂相

3．4．3 蹄叶层细胞凋亡

4 讨论

4．1 蹄叶炎与指骨

4．2 蹄叶炎与血管生成

4．3 蹄叶炎与细胞外基质

4．4 蹄叶炎与细胞增殖和凋亡

4．5 蹄叶炎与炎症

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士期间发表的学术论文