锰中毒导致鸡肝脏炎症相关因子mRNA表达增加以及肝脏损伤

摘要

锰，作为生物体内必需的一种微量元素，广泛分布在多种不同的生物体器官及组织内。微量元素锰在机体的生长发育等方面都发挥着极其重要的作用。然而，金属锰也属于一种常见的环境污染物。当生物体长时间处于在锰环境中，或者吸入过量锰的时候，不仅能够对机体产生不同程度的损伤，还能够引起机体锰中毒，例如，锰中毒能够对神经、消化、泌尿生殖以及免疫系统等正常生理功能造成一定程度的影响。目前，国内外研究锰的毒性相关的实验，多数都是以人和鼠作为研究对象展开的研究，而对于禽类锰毒性的研究和报道却很少。所以，本试验以海蓝鸡为试验动物，我们的试验将180只1日龄健康的海蓝鸡随机分成对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组共四组。对照组中饲喂正常日粮，而将低剂量组、中剂量组、高剂量组分别按锰对鸡半数致死量的染毒量换算成饲料摄取量，进行拌料染锰，使低剂量组、中剂量组、高剂量组中饲喂的日粮锰含量分别达到:600mg/kg、900mg/kg和1800mg/kg。在试验进行的第30天、60天、90天每组随机抽取15只鸡，处死后取肝脏组织样。试验内容为观察肝脏组织在光学显微镜和透射电子显微镜下的病理学变化，并检测肝脏组织NO含量和iNOS活性，以及运用实时定量PCR技术对鸡肝脏组织中NF-κB、TNF-α、iNOS、COX-2和PGE2mRNA表达量进行检测。研究锰过量对鸡肝脏功能产生的影响，并初步探讨锰中毒可能造成的毒理学机制。得出以下结果:
　　(1)根据显微观察和超显微观察的结果，结果显示鸡肝脏组织发生损伤;
　　(2)根据试剂盒测定结果发现，鸡肝脏组织中NO含量增加，iNOS活性升高;
　　(3)实时定量PCR检测的结果显示出，鸡肝脏组织中NF-κB、TNF-α、iNOS、COX-2和PGE2mRNA表达升高。
　　我们的研究结果表明，过量的锰暴露能引起炎症反应，使NF-κB、TNF-α、iNOS、COX-2和PGE2mRNA表达增加，并且使鸡肝脏组织中NO含量和iNOS活性提高。所得到的结果表明，鸡肝脏中NF-κB途径在锰诱导的炎症反应中起重要作用。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 锰的理化性质

1．2 锰的生物学功能

1．3 锰中毒的研究进展

1．3．1 锰中毒对神经系统的影响

1．3．2 锰中毒对免疫系统的影响

1．3．3 锰中毒对生殖系统的影响

1．3．4 锰中毒对肝脏的影响

1．4 炎症相关因子的生物学功能

1．5 炎症相关因子在毒理学中的研究进展

1．5．1 NF-κB在毒理学中的研究进展

1．5．2 TNF-α在毒理学中的研究进展

1．5．3 iNOS在毒理学中的研究进展

1．5．4 COX-2在毒理学中的研究进展

1．5．5 PGE2在毒理学中的研究进展

1．6 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验总体设计

2．2 主要仪器与试剂

2．2．1 主要仪器

2．2．2 自配的试剂

2．2．3 购买的主要试剂及试剂盒

2．3 样品的采集与处理

2．4 检测项目与方法

2．4．1 病理学检查

2．4．2 引物的设计与合成

2．4．3 细胞总RNA的提取

2．4．4 反转录反应

2．4．5 实时定量PCR

2．5 数据分析与统计

3 结果与分析

3．1 肝脏病理组织学显微结构和超显微结构的观察

3．1．1 病理组织学显微结构的观察

3．1．2 病理组织学超显微结构的观察

3．2 鸡肝脏NO含量和iNOS活性的测定

3．3 锰对鸡肝脏炎症细胞因子mRNA表达的影响

3．3．1 锰对鸡肝脏NF-κB mRNA表达的影响

3．3．2 锰对鸡肝脏iNOS mRNA表达的影响

3．3．3 锰对鸡肝脏TNFα mRNA表达的影响

3．3．4 锰对鸡肝脏COX-2 mRNA表达的影响

3．3．5 锰对鸡肝脏PGE2 mRNA表达的影响

4 讨论

4．1 锰对鸡肝脏显微结构和超显微结构的影响

4．2 锰对NO含量和iNOS活性的影响

4．3 锰对炎症相关因子mRNA表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文