文摘
英文文摘
1.前言
1.1国内外技术现状及发展趋势(文献综述)
1.2本课题的研究背景、目的和意义
2.水稻线粒体ATP合成酶6kDa亚基基因(RMtATP6)的分离、序列分析及同定
2.1实验材料
2.1.1植物材料
2.1.2实验试剂
2.2实验方法
2.2.1水稻根表达cDNA文库的建立与筛选
2.2.2 DNA序列分析
2.2.3 Southern杂交分析
2.3实验结果与分析
2.3.1RMtATP6基因的分离、序列分析及同定
2.3.2探针标记
2.3.3 RMtATP6基因的Southern杂交分析
3.RMtATP6基因在碳酸盐逆境下的表达特性及在酵母中的表达及功能解析
3.1实验材料
3.1.1植物材料
3.1.2菌株和载体
3.1.3实验试剂
3.2实验方法
3.2.1植物总RNA的提取(Trizol Reagent一步提取法)
3.2.2酵母表达质粒pYES2-RMtATP6的构建及酵母转化
3.2.3酵母总RNA的提取
3.2.4 Northern杂交
3.2.5酵母的培养及生长曲线的制作
3.3实验结果与分析
3.3.1 RMtATP6基因在碳酸盐逆境下的表达特性
3.3.2酵母表达质粒pYES2-RMtATP6的酶切鉴定
3.3.3 RMtATP6基因在酵母中的表达及功能分析
4.RMtATP6基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位
4.1实验材料
4.1.1菌株及载体
4.1.2实验试剂
4.2实验方法
4.2.1质粒pYES2-EGFP和pYES2-RMtATP6-EGFP的构建
4.2.2酵母细胞的培养
4.2.3酵母活细胞的染色
4.2.4活细胞显微镜观察
4.3实验结果与分析
4.3.1质粒pYES2-EGFP和pYES2-RMtATP6-EGFP的鉴定
4.3.2 RMtATP6基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位
5.农杆菌介导转化法转化烟草
5.1实验材料
5.1.1植物材料
5.1.2菌株及载体
5.1.3实验试剂
5.2实验方法
5.2.1 PBI121-RMtATP6植物表达载体的构建
5.2.2农杆菌介导的遗传转化
5.2.3转基因植株的PCR检测
5.2.4转基因植株的Southern杂交检测
5.3实验结果与分析
5.3.1植物表达质粒PBI121-RMtATP6的酶切鉴定
5.3.2烟草转化芽的获得及卡那霉素抗性分析
5.3.3转RMtATP6基因烟草的PCR检测
5.3.4转RMtATP6基因烟草的Southern杂交检测
6.RMtATP6基因的原核表达及融合蛋白的纯化
6.1实验材料
6.1.1菌株及质粒
6.1.2实验试剂
6.2实验方法
6.2.1 RMtATP6-GST融合基因的原核表达载体的构建
6.2.2 RMtATP6-GST融合蛋白的小量诱导表达
6.2.3 RMtATP6-GST融合蛋白的大量表达及纯化
6.2.4 Western blotting分析
6.3实验结果与分析
6.3.1 RMtATP6-GST融合基因原核表达载体的酶切鉴定
6.3.2 RMtATP6-GST融合蛋白的表达
6.3.3 RMtATP6-GST融合蛋白的纯化
6.3.4 Western blotting分析
7.结论与讨论
7.1水稻线粒体合成酶6kDa亚基基因的同定
7.2 RMtATP6基因的定位
7.3 RMtATP6基因与碳酸盐逆境的关系
参考文献
致谢
