外植体的母树来源对水曲柳体细胞胚胎发生的影响

摘要

研究体细胞胚胎发生是基因工程以及突变体筛选的基础，是优良品系的快繁体系得到实际生产应用的前提。水曲柳(FraxinusmandshuricaRupr.)外植体的母树来源对体细胞胚胎发生的影响，这一研究是判断植物增生途径的有效方法和手段。本文就东北地区重要的用材树种和园林绿化树种水曲柳的不同母树来源的成熟、未成熟子叶体细胞胚发生以及植株再生进行了系统研究，主要结果如下： 以同一地点不同母树来源的水曲柳未成熟合子胚子叶为外植体，进行体细胞胚胎发生研究，研究结果表明，不同的母树来源的子叶体细胞胚发生诱导需要不同的最适激素组合，其诱导频率也不同，分别为：母树3，NAA2mg/L+BA0.5mg/L，其诱导频率为54％；母树1，NAA1.5mg/L+BA0.5mg/L，18％；母树4，NAA1mg/L+BA0.5mg/L，16％；母树2，NAA1.5mg/L+BA0.5mg/L，12％。 对分别采自哈尔滨实验林场、露水河林业局以及帽儿山实验基地36株不同母树来源的成熟合子胚子叶为外植体进行体细胞胚胎发生研究，以MS1/2为基本培养基，附加NAA5mg/L、BA2mg/L、水解酪蛋白400mg/L、蔗糖70g/L、琼脂6g/L，pH值高压灭菌前调至5.8。研究结果表明，不同采种地区母树来源的子叶体细胞胚诱导频率不同；同一采种地区不同母树来源的子叶体细胞胚胎诱导频率相差较大；从最大诱导率15.00％到未能诱导体细胞胚胎发生。 球型胚、心型胚、鱼雷型胚体细胞胚以及胚性愈伤在MS1/2+0.01mg/LNAA+200mg/L水解酪蛋白、蔗糖20g/L、琼脂7g/L、pH值高压灭菌前调至5.8的培养基上增殖最佳；单独接种子叶型体细胞胚于上述培养基上可繁殖成苗。 通过细胞组织学方法研究体细胞胚的起源与发生部位，采用石蜡切片法，结合艾氏苏木精整体染色，在光学显微镜下，发现水曲柳体细胞胚为单细胞起源，直接发生于外植体的表皮层细胞。间接发生的体细胞胚则形成于愈伤组织的表面或内部。胚性愈伤组织细胞较小，接近圆形，排列紧密，胞质浓厚，核大，核仁明显。非胚性细胞相对较大，形状不规则，排列疏松或紧密，胞质稀薄，大液泡，核小，偏向细胞一侧。体细胞胚经球型胚、心型胚、鱼雷型胚、子叶型胚最后发育为再生植株。鱼雷期以后维管束呈明显“丫”字形，与母体组织无联系。两极明显。

目录

文摘

英文文摘

1绪论

2水曲柳体细胞胚胎发生及植株再生

3水曲柳体细胞胚胎发生的细胞生物学观察

4结论

参考文献

图版

附录 缩略词中英文对照表

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

独创性声明及学位论文版权使用授权书