高效诱导提取木豆叶中木犀草素、芹菜素研究

摘要

本文考察了酸、酶、紫外辐射诱导对木豆叶中木犀草素、芹菜素含量的影响，并对超声提取，大孔吸附树脂分离，聚酰胺柱层析纯化酶诱导后木豆叶中木犀草素、芹菜素的工艺条件进行了系统的研究。 1．确定了反相高效液相-二极管阵列检测器方法同时测定木豆叶中木犀草素、芹菜素的条件： 色谱柱：HIQ SIL C18V柱(250 mm×4.6 mm I．D．)，流动相：乙腈-水-乙酸(30：69.3：0.7，v/v/v)，流速：1 mL/min，检测波长345 nm，进样量10μL，柱温30℃。 2．考察了酸诱导及酶诱导条件对木犀草素、芹菜素含量的影响，对影响含量的主要因素进行了研究，确定了最佳工艺参数。 酸诱导水解处理木豆叶的工艺参数为： 水解方式：双向酸水解盐酸浓度：0.5 mol/L水解时间：8 h水解温度：90℃ 在上述优化的条件下，酸诱导水解处理后木犀草素的含量为0.124 mg/g,芹菜素的含量为0.056 mg/g，分别比未经酸诱导水解处理提高61.1％和43.6％。 酶诱导处理木豆叶的工艺参数为： 酶种类：果胶酶酶浓度：0.4 mg/mL酶诱导时间： 36 h酶溶液pH值：3.5-4温度： 30-35℃ 在上述优化的条件下，酶诱导处理后木犀草素的含量为0.268 mg/g，芹菜素的含量为0.132 mg/g，分别比未经酶诱导处理提高248.1％和238.5％。 3．确定了以酶诱导后木豆叶为原料，超声提取木犀草素、芹菜素的工艺条件： 提取溶剂：体积分数80％乙醇溶液液固比： 20：1提取次数及时间：3次，每次15 min，共45 min提取功率： 250 W在上述条件下，木犀草素、芹菜素的提取率分别为0.257 mg/g和0.126 mg/g，在浸膏中的含量分别为0.169％和0.083％。 4．应用大孔吸附树脂对木犀草素、芹菜素进行了分离，确定了AL-2大孔吸附树脂分离木犀草素、芹菜素的最佳条件： 上样浓度：木犀草素52.4 μg/mL，芹菜素25.6 μg/mL上样体积： 3 BV上样流速： 15 BV/h上样pH值： 5解吸溶液及体积：体积分数50％乙醇溶液2 BV及体积分数60％乙醇溶液2 BV解吸流速：1BV/h操作温度： 25℃ 在上述优化的条件下，经过AL-2大孔吸附树脂处理，木犀草素的含量从0.169％增加到2.55％，提高了15.1倍，芹菜素的含量从0.083％增加到0.76％，提高了9.2倍，回收率分别为78.54％和72.31％。 5．采用聚酰胺柱层析对AL-2树脂分离后的木豆叶样品进行纯化，体积分数60％乙醇洗脱，木犀草素含量由2.55％提高到42.39％，回收率为69.42％，体积分数80％乙醇洗脱，芹菜素含量由0.76％提高到14.52％，回收率为72.86％。

目录

文摘

英文文摘

声明

1绪论

1.1木豆的基本特征

1.2木豆研究与应用概况

1.2.1木豆化学成分的研究

1.2.2木豆的药用及药理研究

1.3木犀草素、芹菜素的药理作用

1.4酸诱导水解及酶诱导技术

1.4.1酸诱导水解技术

1.4.2酶诱导技术

1.5超声波提取技术

1.6大孔树脂分离技术

1.6.1大孔吸附树脂技术的特性及原理

1.6.2大孔吸附树脂技术在中药有效成分分离中的应用

1.7聚酰胺层析技术

1.8研究目的和意义

2木犀草素、芹菜素分析方法的建立

2.1实验部分

2.1.1实验仪器与试剂

2.1.2标准溶液的配制

2.1.3样品溶液的制备

2.2结果与讨论

2.2.1色谱条件的优化

2.2.2方法学的确认

2.2.3木豆叶样品溶液的测定

2.3本章小结

3酸、酶及紫外辐射诱导对木犀草素、芹菜素含量的影响

3.1实验部分

3.1.1实验仪器与试剂

3.1.2酸诱导水解实验

3.1.3酶诱导实验

3.1.4紫外辐射诱导实验

3.2结果与讨论

3.2.1酸诱导水解条件的优化

3.2.2酶诱导条件的优化

3.2.3紫外辐射诱导

3.3本章小结

4酶诱导后木豆叶中木犀草素、芹菜素提取工艺研究

4.1实验部分

4.1.1仪器与试剂

4.1.2木犀草素、芹菜素的HPLC分析

4.1.3提取率计算公式

4.1.4木豆叶的酶诱导处理

4.1.5不同提取方法分析样品的制备

4.1.6不同提取溶剂分析样品的制备

4.1.7不同液固比分析样品的制备

4.1.8不同提取时间分析样品的制备

4.2结果与讨论

4.2.1提取方法的选择

4.2.2提取溶剂的选择

4.2.3液固比的选择

4.2.4提取时间的选择

4.3本章小结

5大孔吸附树脂分离木犀草素、芹菜素的研究

5.1实验部分

5.1.1仪器与试剂

5.1.2大孔吸附树脂的物理性质

5.1.3大孔吸附树脂的预处理

5.1.4树脂含水率的测定

5.1.5样品溶液的制备

5.1.6木犀草素、芹菜素的HPLC测定

5.1.7静态吸附、解吸实验

5.1.8动态吸附、解吸实验

5.1.9梯度解吸研究

5.1.10树脂的吸附量和解吸率公式

5.2结果与讨论

5.2.1树脂吸附量、吸附率、解吸率

5.2.2样品溶液pH值的影响

5.2.3 D101、D3520、AL-2树脂的吸附动力学曲线

5.2.4 AL-2树脂的吸附等温线

5.2.5 AL-2树脂的静态解吸

5.2.6 AL-2树脂的动态泄漏曲线

5.2.7 AL-2树脂的动态解吸曲线

5.2.8梯度解吸研究

5.3本章小结

6柱层析纯化木犀草素、芹菜素研究

6.1实验部分

6.1.1实验仪器与试剂

6.1.2聚酰胺柱层析

6.2结果与讨论

6.3本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢