花楸体胚发生的外植体和培养基效应及生化物质变化研究

摘要

花楸(Sorbus pohuashanesis Hedl)具有重要观赏价值和经济价值。本研究以花楸成熟合子胚和未成熟合子胚为外植体诱导体胚发生，研究外植体、培养基对体胚发生的影响和体胚发生中的生化物质变化特点，为进行快速繁殖、生理生化研究及遗传工程研究提供有效离体培养系统服务。主要结果如下： (1)完整的合子胚是最适合花楸体胚诱导的外植体。以花楸成熟合子胚为外植体，不同产地体胚发生差异为吉林敦化>黑龙江森林公园>伊春五营森林公园>五常。以花楸未成熟合子胚为外植体，产地差异为吉林延吉>黑龙江森林公园>伊春植物园。7月中旬为最佳幼胚外植体取材时期。 (2)花楸成熟合子胚为外植体时，MS+NAA 2.0 mg/L+6-BA 1.5 mg/L对诱导胚性愈伤组织和体胚发生效果最好，愈伤组织诱导率达91.67％，体胚发生率达30.67％。花楸未成熟合子胚为外植体时，MS+2,4-D 0.2 mg/L+6-BA1.0 mg/L诱导效果最好，体胚发生率达到39.20％。MS+6-BA1.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L最适合继代培养。超过4次继代后几乎所有的体细胞胚愈伤组织化、褐化至死亡。在花楸体胚诱导阶段适宜暗培养。 (3)胚性愈伤组织的淀粉含量、可溶性蛋白含量、非胚性愈伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶活性均高于其他类型的愈伤组织；可溶性糖含量在光下培养的愈伤组织中最高；细胞增殖速度缓慢的胚性愈伤组织中干物质含量明显高于细胞增殖速度较快的非胚性愈伤组织。 (4)可溶性糖含量最高的时期鱼雷形胚时期，淀粉含量最高时期为胚性愈伤组织时期，二者均在球形胚时期最低。SOD、POD活性均在胚性细胞向球形胚转化时下降，球形胚向心形胚发育时同样下降，从心形胚向鱼雷形胚和鱼雷形胚向子叶形胚发育时再升高；CAT活性从胚性细胞向心形胚至鱼雷形胚发育的3个时期内表现为下降-升高-下降的趋势，在鱼雷形胚向子叶胚发育时略有回升。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 绪论

1.1植物体细胞胚胎发生的普遍性

1.2蔷薇科植物体细胞胚胎发生研究进展

1.2.1体细胞胚的诱导

1.2.2体细胞胚胎发生的影响因素

1.3体胚发生过程中生理生化变化研究

1.3.1植物体胚发生酶动态变化

1.3.2植物体细胞胚胎发生蛋白质代谢

1.3.3植物体细胞胚胎发生碳水化合物变化

1.3.4其他

1.4花楸繁殖研究进展及存在的问题

1.4.1花楸概况

1.4.2花楸繁殖研究进展

1.5研究目的及意义

2花楸体胚发生的外植体和培养基效应

2.1材料与方法

2.1.1试验材料

2.1.2实验方法

2.2结果与分析

2.2.1花楸成熟合子胚体胚发生的外植体和培养基效应

2.2.2花楸未成熟合子胚体细胞胚胎发生的外植体和培养基效应

2.3讨论

2.3.1不同产地对花楸成熟合子胚与未成熟合子胚体胚发生的比较

2.3.2激素组合对花楸成熟合子胚与未成熟合子胚体胚发生的影响

2.3.3合子胚采集时期对花楸体胚发生的影响

2.3.4培养条件对花楸体胚发生的影响

2.3.5花楸体细胞胚的保持与增殖

2.4本章小结

3花楸体胚发生的生理生化研究

3.1材料与方法

3.1.1试验材料

3.1.2生理指标测定方法

3.2数据处理

3.3结果与分析

3.3.1干物重百分含量变化

3.3.2可溶性糖含量的变化

3.3.3淀粉含量的变化

3.3.4可溶性蛋白含量的变化

3.3.5 SOD活性的变化

3.3.6 POD活性的变化

3.3.7 CAT活性的变化

3.4讨论

3.4.1不同的花楸愈伤组织胚胎发生能力的差异

3.4.2花楸体胚发生、发育中可溶性糖、淀粉变化

3.4.3花楸体胚发生、发育中保护酶变化

3.5本章小结

结论

创新点

存在问题及展望

图版

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢