长叶点地梅(Androsace longifolia)组织培养与细胞悬浮培养条件初探

摘要

长叶点地梅(Androsace longifolia)是报春花科点地梅属的一种草本植物，且为多年生花期在5月，其植株较矮小，单朵花虽小，但花色清新，是东北地区难得的早春野生花卉，具有很高的观赏价值，但是目前，对其的研究还很少，鉴于它在园林应用上的前景广阔，有必要通过快繁对其在种质资源保存和新品种开发方面进行探索。
　　本研究以长叶点地梅的种子为外植体，以不同的方法进行消毒处理。利用愈伤组织、不定芽的诱导、丛生芽增殖三种不同途径建立了其植株的再生体系，主要结果如下:
　　1.建立长叶点地梅快繁体系时，其种子的最佳消毒方法为:在装有75％酒精的无菌三角瓶中迅速冲洗30s后，迅速转入无菌水中冲洗3次，再用10％ NaClO消毒12min，再在用无菌水冲洗5次，污染率为5.0％，平均萌发率达66.7％。
　　2.用长叶点地梅的叶片及其下胚轴诱导愈伤组织的过程中，结果表明:下胚轴愈伤诱导的最佳培养基为MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/L NAA，诱导率达85％;叶片愈伤诱导的最佳培养基为:蔗糖浓度3％，琼脂浓度为8.0g/L，MS+1.0mg/L2，4-D+0.2mg/L6-BA，诱导率达83.3％。
　　3.愈伤组织的最佳继代培养条件为暗培养，培养基为MS+0.5mg/L6-BA，其中蔗糖浓度为3％，pH5.4，该条件下，褐化率仅为2.8％。
　　4.叶片愈伤和下胚轴愈伤诱导不定芽的研究表明:叶片愈伤诱导芽的在最佳培养基为MS+0.07mg/L TDZ+0.1mg/L KT，每块愈伤平均分化的芽数为6.3个;下胚轴基部愈伤为诱导芽的最佳愈伤组织，最佳激素比为0.5mg/L6-BA+0.2mg/L KT。不定芽最佳生根培养基为MS+活性炭1g/L+0.8mg/L NAA，成活率92.5％。
　　5.叶片直接诱导不定芽过程中发现:叶片的上、中、下三部分，下部分化能力最强，最佳培养基为:MS+2mg/L6-BA+2mg/L TDZ，在该实验限定的条件下，中、上部未表现出分化能力。丛生芽增殖的最佳培养基为MS+1g/L活性炭）+0.12mg/LTDZ+0.01mg/L NAA，增殖系数最高达11.9。丛生芽的最佳生根培养基为MS(活性炭1g/L)+1.0mg/L IBA，成活率达70.6％。
　　6.长叶点地梅愈伤组织细胞悬浮培养最佳条件为:蔗糖浓度为2％的MS+0.3mg/L6-BA，摇床转速为105rp/min，采用100ml三角瓶，每瓶培养液50ml时，悬浮体系的细胞最佳起始接种量为2.0g。

目录

摘要

1 绪论

1．1 引言

1．2 野生花卉的组织培养的研究

1．3 报春花科植物组织培养的研究

1．4 影响组织培养成功与否的主要因素

1．4．1 外植体

1．4．2 基因型

1．4．3 植物生长调节剂

1．4．4 其他添加物

1．4．5 组织培养中基本培养基的类型及碳源

1．4．6 光

1．5 组织培养中常出现的两大问题

1．5．1 褐化现象

1．5．2 玻璃化现象

1．6 细胞悬浮培养

1．6．1 细胞培养的影响因子

1．7 研究目的和意义

2 长叶点地梅在引种地的物候期观察

2．1 材料与方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 结果与分析

2．2．1 长叶点地梅在哈尔滨的物候期

2．2．2 种子形态特征观察及千粒重测量

2．3 本章小结

3 愈伤组织途径建立再生体系

3．1 材料与方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．2 结果与分析

3．2．1 消毒时间对长叶点地梅种子萌发的影响

3．2．2 两种培养基对实生苗的影响

3．2．3 愈伤组织的诱导

3．2．4 影响愈伤组织褐化的因子

3．2．5 愈伤分化不定芽

3．2．6 不同浓度NAA对长叶点地梅不定芽生根及移栽的影响

3．3 本章小结

4 长叶点地梅丛生芽的增殖培养

4．1 材料及方法

4．1．1 材料

4．1．2 方法

4．2 结果与分析

4．2．1 叶片直接诱导不定芽

4．2．2 丛生芽增殖

4．2．3 不同浓度IBA对增殖芽生根及移栽的影响

4．3 本章小结

5 长叶点地梅细胞悬浮培养条件初探

5．1 材料与方法

5．1．1 材料

5．1．2 方法

5．2 结果与分析

5．2．1 不同种类和浓度的植物生长调节剂对悬浮细胞生长的影响

5．2．2 不同蔗糖浓度对细胞生长的影响

5．2．3 不同摇床转速对细胞生长的影响

5．2．4 培养液pH及电导率、细胞干重的测定

5．2．5 不同愈伤接种量对细胞生长的影响

5．3 本章小结

6 讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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