从杜仲皮中制备松脂醇二葡萄糖苷及多糖工艺的研究

摘要

在我国，杜仲具有很丰富的资源优势，但其资源综合利用率较低，大部分原料处于自生自灭状态，造成了其食用价值和药用价值极大浪费。本论文以我国特色植物资源杜仲为研究对象，以获得目的组分松脂醇二葡萄糖苷和杜仲多糖为研究目标，提出了植物资源的多级化高效利用理念，其涵盖内容如下:采用离子液体-超声辅助提取技术对杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷进行提取，采用响应面法对提取工艺进行优化，采用大孔树脂法对杜仲皮离子液体提取液中松脂醇二葡萄糖苷进行富集纯化;采用超声辅助提取技术对杜仲多糖进行提取，对杜仲多糖体外抗氧化进行了研究。本文系统地研究了杜仲皮中的松脂醇二葡萄糖苷和杜仲多糖高效提取分离的工艺，以及松脂醇二葡萄糖苷纯化方法、杜仲多糖理化性质的研究，其主要内容如下:
　　(1)建立了高效液相色谱(HPLC)法检测松脂醇二葡萄糖苷的方法，色谱条件:检测波长为:228nm;流动相组成及比例:乙腈∶0.4％磷酸=20∶80;色谱柱:KromasilC18(5μm,4.6mm×250mm);流速:1.0mL/min;进样量5μL;柱温:室温;等度洗脱45min。建立了最佳提取杜仲皮松脂醇二葡萄糖苷的工艺，采用响应面法对其提取工艺条件进行了优化。考察了离子液体种类、离子液体溶液浓度、浸泡时间、超声功率、超声时间和液料比等因素对松脂醇二葡萄糖苷得率的影响。研究结果表明，以浓度为1.0mol/L的[Bzmim]Br离子液体为最佳提取溶剂，浸泡时间为3h。在此基础上，采用Design Expert7.0统计分析软件的三因素三水平的响应面分析法进行提取工艺的优化，得到最佳提取工艺条件:超声功率200W、超声时间40min、液料比14∶1。松脂醇二葡萄糖苷的实际得率可达3.12mg/g。
　　(2)采用大孔树脂法对杜仲[Bzmim]Br离子液体提取液中松脂醇二葡萄糖苷富集纯化。通过考察HPD100A、HPD700、HPD400、HPD750、HPD850、HPD600和HPD826大孔树脂对杜仲皮离子液体提取液中松脂醇二葡萄糖苷纯度的影响，筛选出用HPD850型树脂为最佳纯化松脂醇二葡萄糖苷的材料。通过对分离工艺的研究，得出最佳分离工艺条件为:吸附温度为25℃，饱和吸附时间4h，选用松脂醇二葡萄糖苷浓度为9.66mg/L的杜仲[Bzmim]Br离子液体提取液为纯化样品，其对松脂醇二葡萄糖苷的饱和吸附量为15.65mg/g;沈脱剂为20％的乙醇溶液，解吸时间90min，解吸温度25℃，解吸液中松脂醇二葡萄糖苷含量为14.7mg/g，浓缩至干，浸膏中松脂醇二葡萄糖苷纯度为45.8％。
　　(3)确定了采用超声强化溶剂提取法从杜仲皮中提取杜仲多糖的方法，对提取工艺进行了优化。考察了浸泡时间、超声时间、超声功率、超声温度和液料比等因素对杜仲多糖得率的影响，以杜仲多糖得率为指标，得到最佳提取工艺条件为:浸泡时间2h，超声时间:30min，超声温度40℃，超声功率:250W，液料比12∶1。杜仲多糖得率为1.9％。
　　(4)对制备的杜仲皮多糖的体外抗氧化能力研究采用多指标进行考察。对杜仲多糖的抗氧化活性分析评价结果表明，在相同浓度下，杜仲多糖对DPPH自由基的清除能力明显高于维生素C;杜仲多糖的铁还原能力低于维生素C的铁还原能力，并且杜仲多糖的铁还原能力与其浓度呈正相关。

目录

摘要

1 绪论

1．1 杜仲简介

1．2 杜仲的药用部位及药理作用

1．2．1 降血压作用

1．2．2 降血脂作用

1．2．3 增加骨密度 抗骨质疏松

1．2．4 抗氧化、防衰老

1．2．5 抗肿瘤、增强免疫力

1．2．6 其他作用

1．3 杜仲中的主要化学成分

1．3．1 黄酮类

1．3．2 木脂素类

1．3．3 苯丙素类

1．3．4 环烯醚萜类

1．3．5 多糖类

1．4 松脂醇二葡糖苷(PDG)

1．5 松脂醇二葡萄糖苷的提取分离方法

1．5．1 溶剂提取法

1．5．2 超声提取法

1．5．3 微波辅助提取法

1．5．4 酶法提取

1．5．5 微生物发酵

1．6 松脂醇二葡萄糖苷的纯化方法

1．6．1 大孔吸附树脂纯化法

1．6．2 溶剂萃取法

1．6．3 多级硅胶柱层析分离

1．6．4 其他方法的采用

1．7 多糖的提取分离方法

1．7．1 水提醇沉法

1．7．2 酶解法

1．7．3 微波提取法

1．7．4 超声提取法

1．8 杜仲的开发和利用

1．9 本课题研究内容及目的

2 离子液体-超声辅助提取松脂醇二葡萄糖苷

2．1 实验材料与仪器

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验试剂和仪器

2．2 实验方法

2．2．1 标准品溶液的配制

2．2．2 样品溶液的制备

2．2．3 分析方法

2．2．4 单因素实验

2．2．5 工艺优化实验

2．2．6 方法学考察

2．2．7 与传统方法的比较

2．3 结果与讨论

2．3．1 检测方法的建立

2．3．2 单因素实验

2．3．3 响应面法优化提取工艺参数

2．3．4 最佳工艺条件的验证实验

2．3．5 提取方法的比较

2．3．6 方法考察

2．4 本章小结

3 大孔树脂纯化松脂醇二葡萄糖苷

3．1 实验材料与仪器

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验试剂和仪器

3．2 实验方法

3．2．1 松脂醇二葡萄糖苷的定量分析

3．2．2 提取液的制备

3．2．3 大孔树脂的预处理

3．2．4 大孔树脂含水率测定

3．2．5 大孔树脂的筛选

3．2．6 静态吸附实验

3．2．7 解吸实验

3．2．8 纯度测定

3．2．9 动态吸附与动态解析试验

3．3 结果与讨论

3．3．1 大孔树脂的筛选

3．3．2 静态吸附动力学

3．3．3 树脂解吸

3．3．4 动态吸附与动态解析

3．4 本章小结

4 杜仲皮中多糖的提取工艺

4．1 实验材料与仪器

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验试剂和仪器

4．2 实验方法

4．2．1 分析方法

4．2．2 单因素实验

4．3 结果与讨论

4．3．1 单因素试验结果

4．4 本章小结

5 杜仲多糖的体外抗氧化能力研究

5．1 实验材料

5．1．1 实验试剂和仪器

5．2 实验方法

5．2．1 清除DPPH自由基能力测定

5．2．2 铁还原抗氧化能力测定

5．3 结果与讨论

5．3．1 DPPH自由基清除能力

5．3．2 铁还原能力

5．4 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

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