柽柳液泡膜H+-ATPasec'亚基(ThVHAc'1)基因面耐盐功能分析

摘要

植物液泡膜H+-ATPase(V-ATPase)是一个多亚基复合蛋白，在植物中最基本的功能是维持细胞质内的酸碱性内平衡状态（pH值内稳态）和建立跨膜电化学梯度、为相关的代谢提供能量。当植物处于逆境条件下，V-ATPase在调控植物响应逆境过程的功能具有复杂性和多样性。对V-ATPase全酶功能的了解可以通过其关键亚基的深入研究来实现，有研究报道了其中的a、c、G等亚基的抗逆功能。但鲜有关于c

目录

摘要

1 绪论

1．1 引言

1．2 柽柳抗逆研究概述

1．3 植物耐盐调控研究进展

1．4 V-ATPase研究进展

1．5 本研究的目的与意义

2 柽柳ThVHAc〃1基因的表达模式及亚细胞定位

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 菌种与载体

2．1．3 主要试剂

2．1．4 溶液配制

2．2 实验方法

2．2．1 ThVHAc〃1基因的表达分析

2．2．2 ThVHAc〃1蛋白的亚细胞定位

2．3 实验结果与分析

2．3．1 逆境胁迫下ThVHAc〃1基因的表达模式

2．3．2 ThVHAc〃1蛋白的亚细胞定位

2．4 本章讨论与小结

3 转ThVHAc〃1基因酵母抗逆性分析

3．1 实验材料

3．1．1 菌种和载体

3．1．2 主要试剂

3．2 实验方法

3．2．1 酵母表达载体的构建

3．2．2 重组质粒和pYES2质粒的酵母转化及鉴定

3．2．3 重组酵母的逆境胁迫实验

3．2．4 重组酵母逆境胁迫下的存活率

3．3 结果与分析

3．3．1 表达载体及酵母重组子的获得

3．3．2 重组酵母抗逆性分析

3．4 本章讨论与小结

4 ThVHAc〃1基因转拟南芥和瞬时转化柽柳耐盐分析

4．1 植物材料及试剂药品

4．1．1 试剂

4．1．2 载体与菌种

4．1．3 药品及培养基配置

4．2 实验方法

4．2．1 植物过表达载体pROKⅡ-ThVHAc〃1的构建

4．2．2 pROKⅡ-ThVHAc〃1转化拟南芥

4．2．3 转基因拟南芥耐盐功能分析

4．2．4 植物抑制表达载体RNAi∷ThVHAc〃1的构建

4．2．5 瞬时表达ThVHAc〃1的耐盐功能分析

4．2．6 数据处理与分析

4．3 结果与分析

4．3．1 植物过表达载体pROKⅡ-ThVHAc〃1的构建

4．3．2 ThVHAc〃1转化拟南芥的筛选

4．3．3 ThVHAc〃1转基因拟南芥的表达分析

4．3．4 盐胁迫下转ThVHAc〃1基因拟南芥的发芽与生长

4．3．5 ThVHAc〃1转基因拟南芥的组织染色

4．3．6 转ThVHAc〃1基因拟南芥的生理表现

4．4 瞬时表达ThVHAc〃1基因柽柳耐盐能力分析

4．4．1 RNAi∷ThVHAc〃1的构建

4．4．2 瞬时表达柽柳的获得

4．4．3 瞬时表达柽柳耐盐生理途径分析

4．5 本章讨论与小结

5 ThVHAc〃1基因启动子克隆和分析

5．1 实验材料

5．1．1 植物材料

5．1．2 菌种与载体

5．1．3 常用试剂

5．1．4 药品及培养基配置

5．2 实验方法

5．2．1 柽柳基因组DNA提取

5．2．2 ThVHAc〃1基因的启动子克隆

5．2．3 ThVHAc〃1上游调控因子研究

5．2．4 ThVHAc〃1上游调控基因与顺式作用元件的互作验证

5．3 结果与分析

5．3．1 ThVHAc〃1基因启动子的克隆

5．3．2 ThVHAc〃1上游调控因子的筛选

5．4 本章讨论与小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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