大兴安岭地区貂熊冬季的食性分析

摘要

本研究利用2013年12月至2015年1月冬季在黑龙江双河国家级自然保护区(124°52′48″～125°32′03″E，52°54′25″～53°54′08″N)通过跟踪貂熊（陆生犬型类鼬科（也叫貂科）动物）足迹链采集的26份貂熊粪样，作为貂熊冬季食性研究的样本，以粪便显微技术分析法初步鉴别貂熊的食物种类，并通过粪便DNA分析法将成功提取的粪便中毛发mtDNA的26份作为分析样本，应用选取的7对特异性mtDNA引物对貂熊粪便样品进行基因测序，结合GenBank下载的动物序列数据，通过分析所测得的mtDNA序列确认粪便中出现的食物种类，用出现比例和相对出现比例方法对貂熊的食性进行分析，获得以下主要结果和结论:
　　黑龙江双河国家级自然保护区的貂熊冬季食性研究表明，狍、马鹿、雪兔、驼鹿是貂熊冬季的重要食物来源，也是貂熊的主要食物。梅花鹿、鼠类、紫貂也是貂熊冬季可获得的食物来源。
　　1)粪便显微技术分析法结果表明:
　　粪便显微分析法得出的出现比例为，狍占57.58％，雪兔占24.24％，鼠类占18.18％;相对出现比例为，狍占73.08％，雪兔占30.77％，鼠类占23.08％。获得的貂熊冬季的粪样中未发现鸟类的喙、爪、羽毛等残余物。
　　2)粪便DNA分析法结果表明:
　　粪便DNA分析法得出的出现比例为，雪兔占24.32％，狍占21.62％，马鹿占18.92％，驼鹿占16.22％，梅花鹿8.11％，鼠类占8.11％，紫貂占2.70％;相对出现比例上雪兔占69.23％，狍占61.54％，马鹿占53.85％，驼鹿占46.15％，梅花鹿23.08％，鼠类占23.08％，紫貂占7.69％。显微组织学技术难以识别鉴定的动物，利用DNA测序结果结合GenBank中已公布的鹿科动物的线粒体基因组全序列，应用邻接法分别构建所检测DNA的序列和鹿科动物的系统发育树。结果表明食性中鹿科动物包含:狍、梅花鹿、马鹿、驼鹿。
　　3)粪便显微技术分析法和粪便DNA分析法在本研究中各有优缺点:粪便显微分析法可以依据现代显微组织学技术对粪便残余物进行鉴别，但是此法是通过肉眼收集和物种鉴定受到一些学者的质疑;粪便DNA分析法可以鉴别出被消化掉的物种，而且可以把食物鉴定到种，可以弥补粪便显微分析法无法鉴别的物种，但该法存在DNA降解、错配现象，降低了鉴定结果的准确性。

目录

摘要

1 绪论

1．1 引言

1．2 貂熊的生物学概述

1．2．1 形态特征

1．2．2 栖息地与分布

1．2．3 食性

1．2．4 家域

1．2．5 研究与保护现状

1．3 食肉动物食性研究的主要方法

1．3．1 直接观察法

1．3．2 粪便显微分析法

1．3．3 粪便DNA分析法

1．3．4 胃容物分析法

1．3．5 同位素分析法

1．3．6 X射线分析法

1．4 课题来源

2 研究地区的自然概况

2．1 地理位置

2．2 地形

2．3 水文

2．4 气象

2．5 植物资源

2．6 动物资源

3 貂熊食性分析方法

3．1 貂熊粪样的采集

3．2 粪便显微分析

3．2．1 样本处理和玻片制备

3．3 粪便DNA分析

3．3．1 主要仪器设备

3．3．2 DNA序列分析软件

3．3．3 主要试剂及工具酶

3．3．4 毛发DNA的提取

3．3．5 DNA浓度测定

3．3．6 DNA引物扩增和产物的检测

3．3．7 PCR扩增程序

3．3．8 PCR产物分析过程

3．3．9 DNA测序结果分析

3．4 数据处理

4 结果

4．1 粪便样品鉴定结果

4．1．1 样本统计

4．1．2 粪便DNA分析法的结果

4．2 系统进化分析

4．3 本章小结

5 讨论

5．1 粪便显微分析法和粪便DNA分析法比较

5．1．1 基于粪便显微分析法的貂熊冬季食性研究的评价

5．1．2 基于粪便DNA分析法的貂熊冬季食性研究的评价

5．2 貂熊冬季的食物组成

5．2．1 貂熊对大型猎物的捕食

5．2．2 貂熊对小型猎物的捕食

5．2．3 貂熊利用其他大型食肉动物的食物资源

5．3 管理建议

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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