舒尼替尼联合多西他赛对A549肺癌细胞株增殖、凋亡及c-Met、mek、erk基因表达的影响

摘要

背景和目的：
　　 肺癌是目前全球最常见、对人类生命与健康危害最大的恶性肿瘤,发病率和死亡率均居恶性肿瘤首位,且发病率仍呈逐年上升趋势[1-4]。非小细胞肺癌占肺癌总数的80％[5]左右。约70-80%非小细胞肺癌患者确诊时已经是晚期,即使早期患者术后,约30-70%会发生局部复发或远处转移。药物治疗目前仍是晚期肺癌治疗的主要手段之一,尽管优化晚期非小细胞肺癌的化疗方案,但是治疗结果仍然不令人满意。因此,探索新的治疗方案是必要的。一些临床研究显示分子靶向药物联合化疗可进一步提高疗效[6],贝伐珠单抗是一种多靶点抗肿瘤药物,其主要机制是抑制血管内皮生长因子,贝伐珠单抗联合紫杉醇卡铂能延长晚期菲鳞癌肺癌患者的生存期[7]。舒尼替尼是一种小分子多靶点抗肿瘤药物,其主要机制是抑制血管生长因子受体,舒尼替尼联合化疗能否进一步提高疗效。本实验主要研究在体外舒尼替尼与多西他赛单药或序贯应用对肺癌细胞株A549细胞增殖及凋亡的影响,并进一步观察联合用药给药次序不同对c-Met,mek,erk基因表达的影响,探讨何种给药方式能得到最大的获益,为肺癌的临床治疗提供理论基础。
　　 材料与方法：
　　 1、实验细胞株选用人肺癌细胞株A549。
　　 2、实验药物选用舒尼替尼,多西他赛。
　　 3、MTT法测定药物在不同时间、不同浓度对肺癌细胞株A549生长的抑制率,计算药物的IC50值。
　　 4、流式细胞仪检测在不同浓度,不同给药次序的干预下肺癌细胞株A549细胞的周期变化以及凋亡情况。
　　 5、RT-PCR法检测一定药物浓度干预前后细胞基因mRNA c-Met、mek、erk的表达变化情况。
　　 6、实验数据经SPSS18.0统计处理,采用正态性检验,以P＜0.05表示差异显著,P＜0.01表示差异非常显著。
　　 结果：
　　 1、舒尼替尼和多西他赛作用于A549细胞24、48、72 h的IC50分别为(7.72±0.63)、(5.93±0.76)、(3.81±0.48)μmol/L和(29.03±0.52)、(21.34±0.84)、(15.3±0.79)μg/ml;
　　 2、联合用药效果优于单药,两者联合抑制肺癌细胞株增殖作用与给药顺序呈明显相关性,多西他赛序贯舒尼替尼表现出明显的协同效应,而舒尼替尼序贯多西他赛以及舒尼替尼多西他赛同时给药则作用效果不明显。
　　 3、流式细胞术(the Flow Cytometry,FCM)检测结果显示,舒尼替尼单药干预后A549细胞停滞于S期细胞增多,多西他赛干预后停滞于G2/M期细胞增多。当多西他赛序贯舒尼替尼时,S期细胞显著增多,G0/G1期细胞则显著减少。
　　 4、RT-PCR结果显示,多西他赛序贯舒尼替尼时c-Met,mek基因mRNA表达水平下降显著,erk基因mRNA表达水平升高显著。
　　 结论：
　　 舒尼替尼和多西他赛均能抑制A549细胞的生长,多西他赛24小时后序贯舒尼替尼能产生明显的协同效应;而舒尼替尼与多西他赛同时应用和舒尼替尼24小时后序贯多西他赛则药物作用不理想。