自然流产患者绒毛组织中PAI-1 4G/5G多态性和uPA基因的表达及其意义

摘要

目的：
　　 自然流产(spontaneous abortion,SA)是妊娠期间常见的并发症,占妊娠总数的10％-15%,其发病机制不清楚,病因复杂。国内外研究示:自然流产患者具有血栓形成的倾向,作为纤溶系统的uPA和PAI-1表达失衡可导致易凝血栓的发生,影响滋养细胞的浸润功能。生理过程中,uPA可以促进子宫内膜基质降解,从而对绒毛浸润、胚胎着床、胎儿生长起重要作用。PAI-1可以抑制uPA的活性,有调节纤溶酶原诱导的绒毛外滋养细胞侵袭转移、细胞外基质降解和血管生成等功能。PA/PAI平衡调节滋养细胞的浸润功能,影响胎儿的血流灌注情况,一旦这一平衡被打破,直接影响着滋养细胞的浸润能力、滋养层绒毛的血流灌注情况,胎儿因供血不足而发生SA。国内外研究资料示:血浆中PAI-1、uPA基因和蛋白表达异常与SA发生有关,但从SA患者绒毛组织种直接提取PAI-1DNA,并分析其基因多态性,以及PAI-1蛋白和uPA蛋白在SA患者绒毛组织中表达情况尚未搜索到足够相关资料。本实验通过测定PAI-1、uPA在绒毛组织中的基因和蛋白表达情况,为SA的病因提供一定的实验室参考依据。
　　 方法：
　　 选取非意愿妊娠而终止妊娠的正常早孕妇女30例为对照组,同期诊断为稽留流产的患者30例为实验组(两组均是在郑州大学第一附属医院妇产科门诊就诊的病人)。在无菌条件下用生理盐水小心冲洗绒毛组织,干净后一部分用10%的甲醛液固定,过夜后石蜡包埋,蜡块于-4℃冰箱中保存。另一部分置于一次性EP管中,5分钟内放入-80℃冰箱中保存;包埋蜡块应用免疫组织化学PV法检测绒毛组织中uPA和PAI-1蛋白表达情况。放入-80℃冰箱中部分应用等位基因特异性-PCR(AS-PCR)法检测PAI-14G/5G多态性的表达情况,RT-PCR法检测uPA mRNA表达情况。
　　 结果：
　　 1.在妊娠绒毛组织中PAI-1蛋白在主要分布在滋养细胞的细胞质中,PAI-1在自然流产组中高表达率(23/30,90.00%)明显高于正常早孕组(5/30,16.67%),差异有统计学意义(X2=32.411,P＜0.05)。
　　 2.uPA蛋白在妊娠绒毛组织中主要在滋养细胞的细胞质中表达,uPA在自然流产组中高表达率(5/30,16.67%)低于正常早孕组(26/30,86.67%),差异有统计学意义(X2=29.433,P＜0.05)。
　　 3.PAI-14G/5G基因多态性AS-PCR结果
　　 以5G/5G为参照,4G/4G基因型在自然流产组高于正常早孕组,差异有统计学意义(X2=3.901 P＜0.05);风险度OR值4.000,95%CI(0.981-16.311)。4G等位基因在自然流产组高于5G等位基因,差异有统计学意义(X2=4.848 P＜0.05),风险度OR值2.27,95%CI(1.088-4.733)。
　　 4.uPAmRNA的RT-PCR结果
　　 uPA在自然流产组与正常早孕组的平均灰度值分别为:0.223±0.018,0.505±0.059,自然流产组低于正常早孕组,差异有统计学意义(t'=14.349P＜0.05)。
　　 5.相关联性分析
　　 采用Pearson相关分析,相关系数r=-0.639,表明在自然流产患者绒毛组织中的uPA蛋白和PAI-1蛋白表达呈负相关。
　　 结论：
　　 1.uPA在绒毛组织中低表达,PAI-1在绒毛组织中高表达与自然流产发生有关,其中PAI-14G/5G多态性与自然流产的发生有关。
　　 2.uPA和PAI-1在绒毛组织中表达失衡与自然流产有关。