甲状腺相关眼病患者血清sICAM-1和sVCAM-1的检测及临床意义

摘要

目的：
　　 甲状腺相关眼病(thyroidassociatedophthalmopathy，TAO)又称Graves眼病(Graves'ophthalmopathy，GO)，时至今日普遍认为此病属于自身免疫或器官免疫性疾病的一种，而且又和全身内分泌系统的功能状态有着密切的关系，尽管一直有来世界各地的不少学者提出了关于甲状腺相关眼病具体发病机制的种种假说，但是迄今为止，仍然不是十分的明了其确切的发病机制。
　　 近年来研究显示，粘附分子、可溶性粘附分子与多种自身免疫性疾病的发病相关，尤其是可溶性细胞间粘附分子-1(solubleintracellularadhesionmolecule-1，sICAM-1，sCD54)和可溶性血管细胞粘附分子-1(solublevascularcelladhesionmolecule-1，sVCAM-1，sCD106)是目前研究的热点，随着对粘附分子广泛且深入的研究，国内外的一些研究发现，粘附分子在甲状腺相关眼病的发生过程中起着重要的作用。有研究显示，眼眶内的血管内皮细胞受损和炎性细胞的浸润是TAO发生的重要因素;而粘附分子表达的增加被认为是人体内的血管内皮细胞和白细胞受到损伤或被激活的标志之一。这对进一步阐明甲状腺相关眼病的致病机理、临床病情监测以及探寻治疗中的免疫调节控制，无疑都具有非常高的基础和临床研究价值。
　　 因此，我们采用酶联免疫吸附法(ELISA)，检测甲状腺相关眼病患者血清中的sICAM-1和sVCAM-1的水平，并与20例正常人血清中的sICAM-1和sVCAM-1的水平做比较，观察在不同活动期及严重程度下sICAM-1和sVCAM-1水平的变化，探讨两者在血清中的水平与TAO的活动性及严重程度的关系，以及在发病机制中的作用，从而以血清学的研究角度，为TAO的诊断、活动性分期和严重程度分度、监测免疫调控状态和评价治疗效果提供新的理论依据。
　　 材料与方法：
　　 1、研究对象及分组
　　 收集2012年2月至2012年8月在我院眼科及内分泌科住院确诊为甲状腺相关眼病的患者血清72例，其中男28例、女44例，患者年龄17岁～65岁，其中30岁～40岁为发病高峰，50岁～60岁为发病次高峰，72例患者的平均年龄为41.6岁。甲状腺相关眼病的确诊依据:根据患者典型的临床表现，包括眼球突出、眼睑回缩，影像学检查发现双眼或单眼多条眼外肌的肌腹肥厚，实验室检查显示甲状腺功能紊乱或者伴有甲状腺功能亢进的病史。限制因素:病例初发，病程限制在半年以内的，未经过系统的糖皮质激素治疗或抗甲状腺药物治疗的患者。排除标准:其他的眼科疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病以及恶性肿瘤等。
　　 根据临床活动性评分标准(clinicactivityscore，CAS)对72例患者进行分期:活动期（CAS≥4分）45例，非活动期（CAS＜4分）27例;根据甲状腺相关眼病病情严重度评估标准(EuropeanGrouponGraves'orbitopathy，EUGOGO)对72例患者进行分度:轻度27例、中重度33例和极重度12例。
　　 正常对照组的选入标准:在同时期于本医院收集的、自愿参加此次实验研究的、年龄与性别相匹配的、健康成年人20例;其中男10例、女10例:患者年龄18岁～60岁，20例正常人的平均年龄为39.8岁。
　　 本研究方案经过郑州大学生命科学伦理审查委员会的审批;并与每位受试对象签订《甲状腺相关眼病血清粘附分子研究知情同意书》。
　　 2、标本收集和处理
　　 所有检测对象（包括72例甲状腺相关眼病患者和20例正常对照受试者），均于晨起空腹，常规消毒，采肘静脉血3mL，将储血管轻轻颠倒3～5次，室温下立放30min～1h后，3000r/min离心10min，用移液枪仔细收集上层的血清，以EP管分装，置于-80℃低温冰箱储存备检。污染和溶血标本舍弃不用。
　　 3、血清sICAM-1和sVCAM-1水平的测定
　　 采用双抗体夹心ELISA法检测血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平。ELISA试剂盒购自美国R&D公司。实验步骤严格按照试剂盒附带的说明书操作进行。设置调节全自动酶标仪在波长为450nm处，依次测定各个微孔的吸光度OD值，sICAM-1和sVCAM-1的浓度通过使用MicrosoftOffice2003Excel软件做标准曲线而计算得出。
　　 4、统计学处理
　　 采用国际通用SASv9.13统计软件。血清sICAM-1和sVCAM-1的检测水平以(x)±s表示。测量出来的各组数据先进行正态性检验和方差齐性检验;多组数据之间总体均数（即，活动期组、非活动期组、正常对照组的均数，轻度活动期组、中重度活动期组、极重度活动期组和正常对照组的均数，轻度非活动期组、中重度非活动期组、极重度非活动期组和正常对照组的均数）的比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，多组之间均数的两两比较采用SNK-q检验。检验水准α=0.05。
　　 结果：
　　 1、不同TAO分期血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平检测结果
　　 活动期组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平显著高于正常对照组和非活动期组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 非活动期组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平与正常对照组相比，检测水平稍有增加，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2、不同TAO严重程度血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平检测结果
　　 活动期:轻度组、中重度组、极重度组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平显著高于正常对照组和非活动期组(P＜0.05);极重度组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平显著高于中重度组、轻度组(P＜0.05);中重度组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平显著高于轻度组(P＜0.05);且随TAO严重程度的加重而增加。
　　 非活动期:轻度组、中重度组、极重度组、正常对照组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平之间的差异无统计学意义(P＞0.05);不随TAO严重程度的加重而增加。
　　 结论：
　　 血清sICAM-1和sVCAM-1的水平与甲状腺相关眼病的活动性及炎症活动严重程度相关，可作为TAO诊断、分期分级、监测病情变化和观察疗效的一项指标。

目录

声明

摘要

符号说明

引言

1 材料与方法

1．1 研究对象及分组

1．2 主要实验试剂

1．3 主要实验仪器

1．4 标本收集和处理

1．5 血清sICAM-1和sVCAM-1水平的测定

1．6 统计学处理

2 结果

2．1 不同TAO分期血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平检测结果

2．2 不同TAO严重程度血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平检测结果

3 讨论

3．1 sICAM-1和sVCAM-1的作用与TAO发病机制

3．2 TAO患者血清中sICAM-1和sVCAM-1水平变化的分析及意义

4 结论

参考文献

附件1

附件2

综述1

综述2

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢