水通道蛋白3、8、9在结肠部分切除大鼠剩余结肠黏膜的变化

摘要

研究背景和目的：
　　水通道蛋白(Aquaporin)又名水孔蛋白是一种位于细胞膜上的蛋白质，在细胞膜上组成孔道，可控制水在细胞的进出。水通道蛋白家族(AQPs)广泛存在于原核和真核生物细胞膜，能高效、选择性的转运水分子，作为庞大的跨膜通道蛋白(major intrinsic protein.MIP)家族中的之一，对调节动、植物的水代谢起着重要的作用。自1988年Agre等发现了这种特殊的蛋白质后，人们通过免疫组化、RT-PCR等研究发现在哺乳动物中有13钟AQP亚型(AQP0-AQP12).国内外文献报道AQP3、8、9等存在结肠，与结肠水分吸收和分泌有密切关系.结直肠癌病人术中均要切除部分结肠，术后腹泻的发生率5～30％，病人需要经历一段艰难的代偿期，存在于结肠黏膜的AQP是否同样发生代偿，AQP是如何变化的。
　　本实验通过制作大鼠结肠部分切除模型，按照RT-PCR原则，检测剩余结肠黏膜中AQP3、8、9mRNA的变化情况，以期从微观角度寻找一条改善结直肠癌术后排便质量的思路，从而进一步提高病人术后的生活质量。SD大鼠结肠大部切除术后，在此期间AQPs表达发生了如何变化，其表达变化是否与代偿有关。
　　材料与方法：
　　由郑州大学动物中心购买约12周龄的Sprague—Dawley(SD)大鼠32，平均体重在250-300g左右，雌雄各半，实验动物合格证书编号为:SCXK(豫)2010-0002，所有大鼠随机分为空白对照组和实验组，各16只;购得大鼠后，在河南省实验动物中心均单笼饲养，使用国家标准的大鼠饲料，饲养7天以适应环境，排除环境等应激刺激对胃肠道的作用。对照组和实验组大鼠的性别、年龄及体重行统计学分析无差异，无统计学意义，有可比性，具体统计学分析见附表1;空白组对照组为假手术组，麻醉后常规开腹后，常规缝合关腹，实验组大鼠行结肠大部切除术;实验组大鼠手术前24小时开始禁食，不禁水;术前对实验组大鼠分别称重，按10mg/kg剂量，对大鼠行腹腔注射麻醉，然后用剪刀对腹部毛发行常规备皮、消毒;手术在无菌操作台进行，腹部正中切口，先找到结肠，在距离回盲部约5cm处行结肠大部切除术，用6/0无创伤缝线间断单层端端吻合肠管，然后用缝合结肠系膜，关腹前腹腔内注射青霉素钠20万单位，最后用普通丝线逐层关腹，术毕将大鼠放人代谢笼;手术后24小时，使用大鼠灌胃器给术后大鼠灌注葡萄糖氯化钠以补充电解质和部分营养，持续两天后，大鼠正常自由进食、水，SD大鼠结肠部分切除模型建立。
　　手术后的第14天，禁食不禁水12小时，随机抽取对照组大鼠6只，麻醉后处死，截取剩余结肠并刮取其黏膜，置入液氮罐中冻存待检;手术后的第28天，处死实验组剩余大鼠，并提取剩余结肠的黏膜，冻存待检;空白对照组大鼠在手术后的第28天，禁食不禁水12小时候，全部处死，提取结肠黏膜冻存待检;手术后测量三组大鼠的粪便含水量;按照RT-PCR方法，检测本实验中所有SD大鼠结肠黏膜中的AQP3、8、9:第一提取总RNA，按照TRIZOL试剂盒的相关说明，对对照组，术后14天组，术后28天组，分别提取总RNA;第二进行PCR扩增，依照cDNA试剂盒上的相关说明，严格按照步骤对三组总RNA进行逆转录扩增;第三逆转录扩增结果，在琼脂糖块上电泳，电泳结果在High Performance Ultraviolet Trans illuminator(UVP)凝胶成像系统上照相，然后观察扩增后的条带与目的条带是否吻合，最后使用相关软件对电泳条带进行相关灰度值的测定，目的蛋白的灰度值与内参蛋白的灰度值之比，作为本次实验的统计数据，然后使用统计软件进行定量分析。
　　结果：
　　1、实验组大鼠，开始排便后，粪便的含水量较空白对照组大鼠，明显增多;术后14天处死组大鼠粪便含水量较术后28天28天处死组大鼠高。
　　2、对照组、实验组术后第14天和术后第28天目的基因条带与内参条带灰度值之比平均值分别为:AQP30.352、0.425、0.614(p＜0.01);AQP8为0.425、0.518、0.733(p＜0.01);AQP9为0.422、0.516、0.632(p＜0.01)。
　　结论：
　　1、在SD大鼠结肠大部切除术后的第14天和第28天，剩余结肠黏膜AQP3、8、9的表达量较空白对照组表达增加，术后28天组较术后14天组表达量进一步增加。
　　2、结肠大部切除术后，剩余结肠黏膜AQP3、8、9代偿性的表达增加，从而使剩余结肠水通道蛋白的载体数量增多，在一定程度上增加了结肠对水分的代谢，从而缩短了手术后的代偿时间。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

前言

材料与方法

1 实验对象

2 实验涉及主要仪器及相关设备

3 实验方法

4 结果

讨论

5 结论

参考文献

综述1 水通道蛋白在消化道分布的研究进展

综述2 水通道蛋白在消化系统之外的研究进展及结肠病变的诊断方法

实验过程相关图片展示

致谢

作者简介及在学校期间发表的学术论文