联检多种肿瘤相关自身抗体对食管癌诊断价值的评价

摘要

背景和目的:
　　 食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，根治的关键在于早发现、早诊断、早治疗，目前临床上缺乏特异的方法早期诊断食管癌。血清生物标志物检测简单易行，为食管癌的早期诊断开辟了新途径。肿瘤患者的免疫系统能够识别癌细胞中某些蛋白的改变并作出免疫应答反应产生自身抗体，这些参与癌变过程的自身组织蛋白被称为肿瘤相关抗原(Tumorassociatedantigen，TAA)。肿瘤相关自身抗体是一种理想的血清标志物，但是只检测一种肿瘤相关自身抗体，其灵敏度较低，远远不能实现早期诊断，联合多种与肿瘤发生密切相关的TAAs检测可明显提高诊断的灵敏度。
　　 本研究通过检测食管癌患者和正常对照血清中的11种(p53、p16、Impl、CyclinB1、C-myc、Ra1A、p62、Survivin、Koc、CyclinD1、CyclinE)与食管癌密切相关的肿瘤相关自身抗体的表达情况，对其诊断食管癌的价值做出综合评价，为建立一种非侵入性的食管癌早期诊断技术提供依据。
　　 方法:
　　 1、血清样本:研究对象共416例，食管癌患者174例，男性115例，女性59例，平均年龄为61.85±9.11岁;正常对照242例，男性159例，女性83例，平均年龄为61.34±10.47岁。
　　 2、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究对象血清中11种肿瘤相关自身抗体，比较不同组别、不同临床分期抗体水平的差异。
　　 3、所有正常对照抗体OD值的平均数加两个标准差作为截断值，计算抗体阳性率，并比较食管癌组与正常对照组、不同临床分期、不同性别组、不同年龄组抗体阳性率的差异。
　　 4、采用筛检试验的方法评价不同TAAs组合串联检测食管癌的诊断价值。
　　 5、采用筛检试验的方法评价不同TAAs组合并联检测食管癌的诊断价值。
　　 6、用Westernblot方法验证ELISA阳性试验结果。
　　 7、统计方法:使用SPSS13.0软件、SAS9.1软件进行数据录入与统计分析，检验水准α取0.05。
　　 结果:
　　 1、除了C-myc、Koc、CyclinD1外，食管癌组与正常对照组其他8种TAAs抗体水平的差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。除了p16、CyclinB1、Koc、CyclinE外，其他7种TAAs抗体水平在不同临床分期中的差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。
　　 2、食管癌组与正常对照组血清中11种TAAs抗体阳性率的差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。抗p16、RalA、Koc、CyclinE抗体的阳性率在不同临床分期的差异无统计学意义（均为P＞0.05）。食管癌不同性别组、不同年龄组抗体阳性率的差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。
　　 3、不同TAAs组合串联检测食管癌，随着加入的抗原数目的增多，检测灵敏度从21.8％下降到零。
　　 4、不同TAAs组合并联检测食管癌，随着加入的抗原数目的增多，检测灵敏度从21.8％增加到75.3％。
　　 5、11种TAAs组合并联检测诊断价值高，检测结果与真实值中度一致。
　　 6、Westernblot试验抗体阳性情况与ELISA试验结果基本一致。
　　 结论:
　　 1、p53、p16、Imp1、CyclinB1、C-myc、RalA、p62、Survivin、Koc、CyclinD1、CyclinE这11种肿瘤相关自身抗体可作为生物标志物，有助于食管癌的诊断。
　　 2、检测食管癌患者血清中肿瘤相关自身抗体的表达情况可作为临床分期的参考指标。
　　 3、多种TAAs并联检测食管癌可以大幅度提高诊断的灵敏度，具有实际应用价值。

目录

声明

论文说明

摘要

英文缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2．1 材料以及仪器设备

2．1．1 血清标本

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．1．4 主要溶液配制

2．2 方法

2．2．1 间接酶联免疫吸附试验(ELISA)

2．2．2 Western blot试验

3 结果与分析

3．1 研究对象的基本情况

3．2 检测单一自身抗体对食管癌诊断价值的的评价

3．2．1 食管癌组与正常对照组抗体水平的比较

3．2．2 食管癌组不同临床分期抗体水平的比较

3．2．3 食管癌组不同临床分期抗体水平的两两比较

3．2．4 食管癌组与正常对照组单一自身抗体的检测结果

3．2．5 食管癌组不同临床分期抗体阳性率比较

3．2．6 不同性别食管癌患者单一自身抗体的检测结果

3．2．7 不同年龄组食管癌患者单一自身抗体的检测结果

3．3 多种TAAs串联检测食管癌的诊断价值评价

3．4 多种TAAs并联检测食管癌的诊断价值评价

3．4．1 多种TAAs并联检测食管癌结果

3．4．2 不同性别食管癌患者多种TAAs并联检测结果

3．4．3 不同年龄组食管癌患者多种TAAs并联检测结果

3．5 11种TAAs并联检测的结果及真实性评价

3．6 Western blot结果

4 讨论

4．1 检测单一抗TAA抗体对食管癌诊断价值的评价

4．1．1 检测抗p53抗体对食管癌的诊断价值

4．1．2 检测CyclinB1、CyclinD1、CyclinE、P16抗体的食管癌诊断价值

4．1．3 检测抗Imp1、p62、Koc抗体对食管癌的诊断价值

4．1．4 检测抗Survivin抗体对食管癌的诊断价值

4．1．5 检测抗C-myc抗体对食管癌的诊断价值

4．1．6 检测抗RalA抗体对食管癌的诊断价值

4．2 多种TAAs串联检测食管癌的诊断价值评价

4．3 多种肿瘤相关抗原并联检测自身抗体诊断食管癌的价值评价

4．4 存在问题与展望

5 结论

参考文献

综述

附录

致谢