趋化因子MIP-1α、MIP-1β、MCP-1在自身免疫性甲状腺疾病中的表达及意义

摘要

背景与目的：
　　 趋化因子(Chemokines)是一组多达50多种的低分子量多肽，它们的分子结构前端均有四个半胱氨酸，目前根据前两个半胱氨酸间是否存在其他氨基酸而被分为四个家族，即CC、CXC、C及CX3C（X代表其他任何氨基酸）。趋化因子能趋化淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等各种白细胞向炎症部位聚集，介导了免疫细胞对组织的浸润、定位及活化，并具有趋化淋巴细胞并形成淋巴滤泡的功能，它们的表达是导致自身免疫性疾病发生发展的一个重要因素。
　　 巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白-1β（MIP-1β）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）是体内一些重要的趋化因子，已证实其参与了多种自身免疫性疾病的发生和发展。Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)是临床上常见的自身免疫性甲状腺疾病，以甲状腺内有大量淋巴细胞浸润和甲状腺自身抗体形成为特征。MIP-1α、MIP-1β和MCP-1是否参与了自身免疫性甲状腺疾病的发生发展，目前国内尚无人研究，国外也研究较少。本研究应用SP(Streptavidin/Peroxidase)免疫组化方法观察MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在GD、HT、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的表达情况，应用ELISA方法检测患者血清趋化因子水平，并与患者术前血清中甲状腺自身抗体进行相关性分析，以探讨这些趋化因子在自身免疫性甲状腺疾病发生发展中的作用。
　　 方法：
　　 收集自2009-2011年在我院住院的甲状腺手术患者的甲状腺组织标本及术前血清，其中GD组44例（男33例，女11例），年龄(33.4±1.51)岁;TH组19例（男0例，女19例），年龄(47.4±2.24)岁;结节性甲状腺肿组10例（男4例，女6例），年龄(55.1±3.32)岁;甲状腺腺瘤组14例（男4例，女10例），年龄(42.3±4.07)岁，正常对照组8例（男2例，女6例），年龄(43.3±3.08)岁，标本为取自甲状腺腺瘤周围正常组织。另取8例（男3例，女5例），年龄(40.3±1.08)岁，在体检科体检健康者，抽取血液标本检测趋化因子作为正常对照。纳入标准:所有病例均经临床、实验室检查及病理诊断确诊;排除标准:排除近期有感染史、女性妊娠、肿瘤、肺部疾病、心血管疾病、器官移植及其他免疫炎性疾病。所有组织标本经固定、脱水、包埋后切片行HE和免疫组织化学染色，每张切片随机选择互不重叠的10个高倍镜视野，结果判定:细胞质内含黄色颗粒为阳性细胞。细胞阳性率评分标准:细胞阳性率＜5％为0分;5％～25％为1分;＞25％～50％为2分;＞50％～75％为3分;＞75％为4分）。染色强度评分标准:无染色为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐为3分。将细胞阳性率评分与染色强度评分的的乘积作为该标本被检趋化因子表达强度的评分。表达强度评分标准:0分为阴性（-）;1～2分为弱阳性(+);3～6分为阳性(++);＞6为强阳性(+++)。所有血清标本采用双抗体夹心法测定标本中三种趋化因子浓度并收集患者术前血清TGAb、TPOAb、TRAb的检测结果。所有数据均采用SPSS17.0统计软件包分析，阳性表达采用等级资料的非参数检验，定量资料的比较采取非参数检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，P＜0.05（双侧）为差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 应用SP免疫组化法检测44例GD、19例HT、14例甲状腺腺瘤、10例结节性甲状腺肿和8例正常甲状腺组织中MIP-1α、MIP-1β和MCP-1的表达情况。结果显示:在GD和HT组织中，MIP-1α、MIP-1β和MCP-1阳性表达信号主要位于甲状腺滤泡上皮细胞的细胞质，呈淡黄色、棕黄色或黄褐色。在TH组织中，可见甲状腺滤泡上皮细胞胞核及部分淋巴滤泡生发中心淋巴细胞亦有阳性表达，被大量淋巴细胞和浆细胞浸润的间质中残存的甲状腺滤泡细胞团几乎全部表达，HE染色为嗜酸性变的细胞表达强度更高，染色呈棕褐色团块状。MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中的表达呈中低度表达，染色呈黄色或浅黄色，MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在正常甲状腺组织中几乎不表达，极少的上皮细胞呈浅黄色，MIP-1α、MIP-1β和MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在GD、HT组织中表达明显高于正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿及甲状腺腺瘤(P＜0.05)。而在GD与HT组之间相比无显著性差异(P＞0.05)。其在正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿及甲状腺腺瘤间的表达亦无统计学差异(P＞0.05)。
　　 Spearman相关分析显示，GD患者甲状腺内MIP-1α的表达程度与血清TRAb值呈正相关(r=0.504，P＜0.05)，与血清TGAb值呈正相关(r=0.365，P＜0.05)，与TPOAb亦密切正相关(r=0.561，P＜0.05);其MIP-1β的表达程度与血清TRAb值呈正相关（r=0.419，P＜0.05），与血清TGAb值呈正相关(r=0.434，P＜0.05)，与TPOAb亦密切正相关(r=0.491，P＜0.05);MCP-1的表达程度与血清TRAb值呈正相关(r=0.482，P＜0.05)，与血清TGAb值呈正相关(r=0.398，P＜0.05)，与TPOAb呈密切正相关(r=0.456，P＜0.05);HT患者甲状腺内MIP-1α的表达程度与血清TGAb值呈正相关(r=0.501，P＜0.05)，与TPOAb呈密切正相关(r=0.397，P＜0.05);其MIP-1β的表达分布与血清TGAb值呈正相关(r=0.536，P＜0.05)，与TPOAb呈密切正相关(r=0.426，P＜0.05);MCP-1的表达分布与血清TGAb值呈正相关（r=0.501，P＜0.05），与TPOAb呈密切正相关(r=0.397，P＜0.05)。
　　 应用ELISA检测各组病例血清MIP-1α、MIP-1β、MCP-1水平（见表6），血清MIP-1α水平在各组间差异无统计学意义(X2=0.326，P＞0.05)。血清MIP-1β水平在各组间差异无统计学意义(X2=2.600，P＞0.05)。血清MCP-1水平在各组间差异亦无统计学意义(X2=5.665，P＞0.05)。
　　 结论：
　　 趋化因子MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在GD和HT患者的甲状腺组织中表达显著高于甲状腺腺瘤、甲状腺结节患者及正常甲状腺组织，且它们的表达与术前血清甲状腺自身抗体呈密切正相关，它们可能参与了自身免疫性甲状腺疾病的发生发展，有可能作为自身免疫性甲状腺疾病监测和治疗的新靶点。

目录

声明

摘要

英文缩略词

引言

1 材料与方法

1．1 研究对象

1．2 主要试剂

1．3 方法

1．4 结果判断

1．5 统计学处理

2 结果

2．1 MIP-1α在各组甲状腺组织中表达情况

2．2 MIP-1β在各组甲状腺组织中表达情况

2．3 MCP-1在各组甲状腺组织中表达情况

2．4 甲状腺内MIP-1α、MIP-1β、MCP-1表达程度与血清甲状腺自身抗体的相关性分析

2．5 各组病例血清MIP-1α、MIP-1β、MCP-1水平比较

3 讨论

4 结论

参考文献

综述

个人简历及研究成果

致谢