葡萄籽提取物对慢性砷暴露致大鼠肝损伤的保护作用

摘要

背景与目的:
　　 砷是一种环境毒物和人体致癌物，在自然环境中广泛分布。包括我国在内，全球有70个国家和地区的人们在受砷污染地下水的影响，慢性砷中毒已成为一个全球性的公共卫生问题。砷能够在肝脏中蓄积，砷中毒患者往往伴有一定程度的肝损伤。虽然砷与肝损伤之间的关系已经确定，但其具体机制仍不明确，目前公认的是氧化损伤学说。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamideadeninedinucleotidephosphate，NADPH）氧化酶是一种由蛋白质亚基组成的复合物，当受到有害因子的刺激时它能产生大量的活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)。过量生成的ROS激活促炎性和促纤维化因子，造成包括DNA、蛋白质和脂类在内的细胞大分子的氧化损伤，出现肝毒性作用。因此，清除ROS，减轻氧化应激可能会减轻砷暴露引起的肝损伤。葡萄籽提取物(grapeseedextract，GSE)富含多酚类物质，在体内能够直接清除ROS，其抗氧化能力强于维生素C、维生素E以及β胡萝卜素。本次研究的目的是观察无急性毒性作用剂量的砷所造成的肝损伤，以及GSE对肝氧化损伤的保护作用，探讨砷致肝损伤的作用机制，为治疗肝损伤提供理论依据。
　　 方法:
　　 在前期建立动物模型的实验数据和文献报道的基础上，进行如下分组:将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组，每组10只，即正常对照组，每日只饮纯水;砷暴露组，每日饮含亚砷酸钠(NaAsO2)30mg/L的水溶液;GSE干预组，以100mg/kg的剂量隔日灌胃;GSE与砷暴露联合干预组，每日饮含亚砷酸钠(NaAsO2)30mg/L的水溶液并以GSE100mg/kg的剂量隔日灌胃。12个月实验期结束，末次染毒后次日，大鼠称重，然后乙醚麻醉，抽取心脏血，制备血清样本，检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白的活性，作肝功能分析;切除肝脏，计算肝脏系数;制备肝组织样本，检测谷胱甘肽(glutathione，GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)的活性、检测组织ROS的水平以及脂质过氧化水平;运用WesternBlot方法检测各组中NADPH氧化酶亚基Nox2、Nox4和p47phox蛋白表达水平。采用统计软件SPSS12.0，对所得数据采用单因素方差分析，各组间的比较采用SNK-q检验，检验水准定为0.05。
　　 结果:
　　 与对照组相比，砷暴露组的肝脏系数升高(q=18.91，P＜0.05);ALT和AST水平升高，白蛋白水平降低（q值分别为43.61，27.13，12.52，P均＜0.05），肝功能明显受损;GSH、SOD和GSH-Px的活性降低（q值分别为91.96，75.24，39.88，P均＜0.05），组织中ROS与MDA水平升高（q值分别为36.79，47.53，P均＜0.05）;NADPH氧化酶亚基Nox2、Nox4、p47phox蛋白表达水平升高;而与砷暴露组相比，GSE联合干预组的各项指标均得到明显改善。
　　 结论:
　　 (1)慢性砷暴露可以促使肝脏中ROS和脂质过氧化产物的增多以及抗氧化酶活性的减弱，导致氧化应激，引起肝损伤。
　　 (2)GSE可改善慢性砷暴露所引起的大鼠的氧化应激及肝损伤。
　　 (3)GSE改善砷暴露致大鼠肝损伤的机制可能与其抑制NADPH氧化酶的活性有关。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

引言

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验动物及饲养

1．1．2 主要实验试剂、耗材和仪器

1．1．3 主要试剂配制

1．2 实验方法

1．2．1 实验分组

1．2．2 实验样品的制备

1．2．3 各项指标的检测与方法

1．2．4 统计分析

2 实验结果

2．1 GSE对砷暴露大鼠生长的影响

2．2 GSE对砷暴露大鼠肝功能的影晌

2．3 GSE对砷暴露大鼠ROS及脂质过氧化水平的影响

2．4 GSE对砷暴露大鼠抗氧化酶的影响

2．5 GSE对砷暴露大鼠NADPH氧化酶亚单位蛋白表达的影响

3 讨论

3．1 GSE对砷暴露大鼠体重、肝重及肝脏系数的影响

3．2 GSE对砷暴露大鼠肝功能的影响

3．3 GSE对砷暴露大鼠氧化应激的影响

3．4 GSE对砷暴露大鼠肝组织中NADPH氧化酶亚单位表达的影响

4 结论

参考文献

综述

个人简历

致谢