丹参酮ⅡA诱导急性早幼粒细胞性白血病细胞株(NB4细胞)分化机制的研究及与ATRA和As2O3的比较

摘要

背景
　　儿童白血病是小儿恶性肿瘤中最常见的类型。急性早幼粒细胞白血病(APL)占急性髓系白血病(AML)的10～15％。随着全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2o3)应用于临床，APL完全缓解率可达90％以上，但ATRA和As2o3的毒副作用及耐药性日益增多，因此，有必要在深入研究ATRA和As2o3的同时，寻找和开发毒副作用小、疗效好的新的治疗方法。丹参酮ⅡA(TanⅡA)是从传统中药丹参提取的主要有效成份，近年来发现TanⅡA在细胞分化过程中具有多种作用，有可能继ATRA和As2o3之后，成为对APL具有良好诱导分化作用，而又较少副作用的药物。但目前对丹参酮ⅡA抗肿瘤的研究还不深入，其抗肿瘤的具体机制并不清楚。
　　目的
　　研究TanⅡA对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的诱导分化、抑制增殖作用机制，并与ATRA及As2o3做比较，探讨TanⅡA诱导分化NB4细胞的分子生物学机制，为TanⅡA用于白血病的临床治疗提供实验和理论依据。
　　方法
　　将APL细胞株NB4细胞分为7组体外培养。在对数生长期分别加入不同浓度的TanⅡA、ATRA、As2o3和DMS0，观测12h、24h、48h、72h、96h、120h细胞的各项指标。观测NB4细胞的生长状况、形态学改变，细胞膜表面分化抗原(CD11b和CD33)的改变，实时定量PCR法检测PML/RARα融合基因、stat1、stat2、stat3、stat5ab基因mRNA水平的表达，Western-blot法检测PML-RARα融合蛋白、STAT1蛋白、STAT2蛋白、STAT3蛋白、STAT5a蛋白、STAT5b蛋白，用荧光免疫组织化学技术对PML-RARα融合蛋白表达进行定位研究。
　　结果
　　1.TanⅡA、As2o3、ATRA均能抑制NB4细胞生长，诱导NB4细胞分化。TanⅡA对NB4细胞抑制生长，诱导分化的作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。0.75umol/LTanⅡA为最佳浓度。
　　2.TanⅡA、As2o3、ATRA均能上调NB4细胞分化抗原CD11b和下调CD33表达。0.75umol/LTanⅡA为最佳浓度。
　　3.TanⅡA、As2o3、ATRA不改变PML/RARαmRNA的表达，可降解PML/RARα融合蛋白，恢复PML蛋白的表达，TanⅡA、As2o3、ATRA能使NB4细胞PML蛋白异常分布重新定位，核小体结构恢复。
　　4.TanⅡA和ATRA能上调Stat1和Stat2基因的表达，促进STAT1和STAT2蛋白的表达。As2o3对Stat1、Stat2基因的和STAT1、STAT2蛋白的表达无影响。
　　5.TanⅡA、As2o3、ATRA不改变stat3、stat5abmRNA水平的表达，对STAT3、STAT5a、STAT5b蛋白的表达无影响。
　　结论
　　TanⅡA能抑制NB4细胞生长，诱导NB4细胞分化，作用强度呈时间和浓度依赖性。0.75umol/LTanⅡA为最佳浓度。TanⅡA不改变PML/RARαmRNA的表达，可降解PML/RARα融合蛋白，恢复PML蛋白的表达，能使NB4细胞PML蛋白异常分布重新定位，核小体结构恢复。TanⅡA和ATRA能上调stat1和stat2基因的表达，促进STAT1和STAT2蛋白的表达。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

前言

第一部分 TanⅡA对NB4细胞形态学及分化抗原表达的影响及与ATRA和As2O3的比较

材料及方法

结果

讨论

结论

第二部分 TanⅡA、ATRA及As2O3对NB4细胞分化过程中PML／RARα融合基因及PML-RARa融合蛋白的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分 TanⅡA、ATRA及As2O3对NB4细胞Stat基因和STAT蛋白的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新点

参考文献

综述 JAK／STAT信号传导通路与白血病

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