PKIP在胃癌组织中的低表达及对其侵袭力的影响

摘要

背景与目的:
　　目前胃癌是最常见的消化系恶性肿瘤之一，在我国甚至全球范围内都有很高的发病率和死亡率[1]。而其中大约70％左右的胃癌发生在资源匮乏的发展中国家。由于胃癌的早期症状不明显，在出现临床征兆时多已为中晚期，治疗效果差。所以降低胃癌死亡的关键因素是早期发现、早期诊断和早期治疗。现在，人们通过研究胃癌的表观遗传学机制发现，胃癌发生发展和多个抑癌基因的失活关系密切[2-5]
　　最近几年，因为发现RKIP能够在多条细胞信号传导通路中发挥极其重要的功能，尤其是最新研究证实RKIP具有抑制肿瘤细胞转移的作用之后[6]，RKIP的研究已成为肿瘤细胞生物学领域中的一个新的研究热点。RKIP是一种高度保守的多功能蛋白，广泛存在于人体的各个组织中，人的RKIP定位于12号染色体q24.22，含4个外显子，其转录的mRNA长达1434bp，编码187个氨基酸组成的蛋白[7]。RKIP是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkniase，MAPK)信号转导通路的自然遏抑物，Yeung等[8]于20世纪初研究表明人PEBP可以和Raf-1连结在一块，进而将Raf-1/MEK/ERK信号转导通路阻遏，所以把PEBP命名为RKIP。RKIP除了抑制制Raf-1/MEK/ERK信号通路，并参与对G蛋白耦联受体信号通路和核因子κB(nuclearfactorκB，NF-κB)信号通路的调控[9][10]。由于这几条信号转导通路在细胞生长、增殖、分化以及凋亡等多个方面具有重要的调节作用，不难得出这个结论:RKIP与肿瘤的发生、发展和转移密切相关，与多种肿瘤的不良预后密切相关[11]。通过实验研究证明RKIP可以抑制恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肝癌等多种恶性肿瘤转移，而且RKIP下调或缺失与前列腺癌，乳腺癌和黑色素瘤等多种人类恶性肿瘤的转移和不良预后有关[12,13]。然而，RKIP在胃癌(GC)转移中的作用尚未见报道，因此RKIP与胃癌发生发展的关系仍需要大量的科学研究去进一步探讨。本科研小组旨在研究RKIP与胃癌发生、发展的关系，以及RKIP表达水平改变对GC细胞体外侵袭能力的影响。
　　材料与方法:
　　1.采集郑州大学第一附属医院胃肠外科自2011年12月至2013年2月手术切除的胃癌组织极其相对应的癌旁正常组织标。所有标本病理诊断明确，术前均未行放、化疗及免疫治疗且所有患者均知情同意签字为凭。手术切除标本离体后用4℃的生理盐水冲洗掉血污，迅速置入无菌冻存管于-80℃冰箱保存备用。
　　2.人胃癌细胞SGC-7901由郑州大学基础医学院提供，为中分化胃腺癌细胞[9]，来源于56岁女性转移性腺癌的淋巴结中的癌组织;细胞在37℃、5％CO2饱和湿度条件下，用含10％FBS的DMEM培养基培养。
　　3.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及蛋白质印迹法(WesternBlot)分别检测胃癌组织及相应癌旁组织中RKIPmRNA和蛋白的表达，采用脂质体转染方法将正义、反义RKIP表达质粒及其相应空白载体分别转染SGC-7901细胞，建立相应的稳定转染细胞系，并用Westernblot检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究分析RKIP表达水平改变对GC细胞体外侵袭能力的影响。
　　4.所有实验数据都应用SPSS17.0统计软件进行统计分析。对胃癌组织和癌旁组织中的RKIPmRNA灰度值进行配对t检验。对临床病理因素间的关系进行x2检验及Fisher确切概率法检验，以P＜0.05作为差异有统计学意义的检验标准。
　　结果:
　　1.RKIPmRNA在胃癌组织中的表达量相对值为(0.12±0.02)，癌旁组织中的表达量为(0.48±0.04)，两组比较差异有统计学意义(t=6.562，P＜0.01)。RKIP的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无关，而与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移与否、肿瘤TNM分期及是否远传转移有关（P＜0.05）。
　　2.RKIP在癌组织中的表达量(0.08±0.02)明显低于癌旁正常组织(0.41±0.04)，两组比较差异有统计学意义(t=7.068，P＜0.01)，RKIP的表达与胃癌组织的分化程度、TNM分期、淋巴结转移与否及是否远处转移有关(P＜0.05)，而与患者年龄、性别和肿瘤大小无关。
　　3.Transwell细胞迁移实验显示，上调RKIP表达，SGC-7901细胞的侵袭能力降低，而下调RKIP表达后SGC-7901细胞的侵袭能力明显提高。
　　结论:
　　1.RKIPmRNA在胃癌组织中表达明显下调或者表达缺失，并且与患者性别、年龄、肿瘤大小无关，而与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移与否、肿瘤TNM分期及是否远传转移有关。这些提示我们RKIP的差异性表达也许和胃癌的发生、发展密切相关，RKIP有可能作为胃癌早期检测的指标之一。
　　2.RKIP表达上调能抑制SGC-7901细胞的侵袭能力，而RKIP表达下调能增加SGC-7901细胞的侵袭能力，RKIP的表达与胃癌细胞体外侵袭能力负相关。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

材料与方法

1 材料

2 实验方法

结果

1．胃癌组织及相应癌旁组织RKIP mRNA的表达

2．胃癌组织及相应癌旁组织RKIP蛋白的表达

3．SGC-7901转染质粒后蛋白的表达

4．RKIP表达水平对胃癌细胞侵袭能力的影响

讨论

结论

参考文献

综述 Raf激酶抑制蛋白在恶性肿瘤生物学行为中的研究进展

在校期间发表的论文

致谢