RetroNectin活化的细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期原发性肝癌的临床研究

摘要

研究背景：
　　原发性肝癌(Primarylivercancer，PLC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，发病率居世界前五位。据2008年统计，全球50％以上的原发性肝癌患者在我国，位居我国恶性肿瘤死因的第二位。PLC病灶以多中心发生为特点，易发生早期的扩散和转移，约80％-90％的患者就诊时已经失去了手术机会。即使对患者施行根治性切除术，术后5年复发率亦达50％以上，且多在术后1～2年内复发，5年生存率仅5％～6％。晚期原发性肝癌对放化疗均不敏感，分子靶向药物索拉菲尼是晚期原发性肝癌的治疗选择之一，但其中位生存期仅约为9.4～10.7个月。因此，努力探求一种新的治疗晚期PLC的手段显得至关重要。近年来，随着人们对肿瘤分子生物学及肿瘤免疫学的探索，晚期原发性肝癌的生物免疫治疗发展迅速，细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells，CIK)的临床研究获得了很大的进展。CIK细胞是在GMP实验室，从患者的外周血中分离出单个核细胞，并在体外使用细胞因子及抗体等与分离出的单个核细胞共同培养一段时间后所得到的异质性胞群，该群细胞可以同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，不仅拥有T淋巴细胞的MHC限制性，而且还具有NK细胞的非MHC限制性，对常见恶性肿瘤细胞及许多耐药肿瘤细胞均具有明显的杀伤活性。研究发现，重组人纤维蛋白（RetroNectin-RN）联合抗CD3单克隆抗体体外包被培养和扩增CIK细胞时可以使CD3Ab与T细胞的接触和黏附进一步增加，不仅可以缩短细胞培养时间，而且可进一步提高细胞的培养效率并避免CIK细胞杀伤活性的降低。本研究收集2010年1月至2013年12月入住郑州大学附属肿瘤医院，并应用R-CIK细胞治疗的晚期原发性肝癌患者的临床资料，观察其临床安全性及临床疗效，并进行统计学分析。
　　研究目的：
　　评价R-CIK细胞治疗晚期原发性肝癌的临床疗效和主要不良反应的发生率，为晚期原发性肝癌提供新的的治疗思路，并为R-CIK细胞的安全应用提供临床数据。
　　研究方法：
　　收集从2010年1月至2013年12月入住郑州大学附属肿瘤医院，经细胞学和/或组织学病理或AFP联合影像学确诊的30例经巴塞罗那分期(BarcelonaClinicLiverCancer，BCLC)为晚期的原发性肝癌患者的临床资料;患者Child-Pugh评分为A/B/C级;所有患者均接受3周期以上的R-CIK细胞治疗。主要观察指标为总生存期(overallsurvivaltime，OS)、6个月生存率、1年生存率及2年生存率，次要观察指标为不良反应发生率和影响患者生存的因素。主要观察指标OS采用Kaplan-Meier方法分析，影响OS的因素采用单因素Log-Rank检验和多因素的Cox比例风险回归模型。
　　结果：
　　(1)30例患者中6个月生存率为73.3％，1年生存率40％，2年生存率16.7％。中位OS为19.5个月;主要不良反应是发热，发生率为20％(6/30);
　　(2)单因素分析结果显示:R-CIK细胞治疗超过6周期的患者、KPS＞70分的患者、年龄≤60岁的患者及没有门脉癌栓的患者具有更长的OS，差异具有统计学意义(P值分别为:0.028，0.003，0.000，0.045);
　　(3)多因素分析结果显示:R-CIK细胞治疗超过6周期的患者、KPS＞70分的患者、年龄≤60岁的患者生存获益，差异具有统计学意义(P值分别为:0.038，0.001，0.008)。
　　结论：
　　(1)R-CIK细胞治疗晚期原发性肝癌安全、有效;
　　(2)晚期原发性肝癌应用R-CIK细胞治疗耐受性良好，患者毒副作用小;
　　(3)行R-CIK细胞治疗周期数较多、年龄相对较小、一般状况较好的晚期原发性肝癌患者预后可能更好。

目录

声明

摘要

主要英文缩略词对照表

引言

对象和方法

1 研究对象

1．1 入组条件

1．2 排除条件

1．3 患者基本资料

2 实验方法

2．1 细胞培养主要试剂

2．2 实验仪器

2．3 R-CIK细胞制备流程

2．4 R-CIK表型检测

2．5 K562细胞的培养

2．6 CFSE／PI双标法检测K562细胞杀伤活性

3 临床研究方法

3．1 临床数据的收集

3．2 R-CIK细胞治疗的方法

3．3 疗效及不良反应评价标准

3．4 患者的随访方法

3．5 采用的统计学方法

实验结果

1 R-CIK细胞表型检测结果(x±s)

2 R-CIK对K562细胞体外杀伤活性实验结果

3 R-CIK临床疗效

4 R-CIK不良反应

5 单因素Log-Rank分析结果

5．1 R-CIK细胞周期数对患者生存期的影响

5．2 年龄对患者生存期的影响

5．3 门脉癌栓对患者生存的影响

5．4 一般状况对患者生存期的影响

6 多因素Cox比例风险回归分析结果

讨论

结论

参考文献

综述部分 晚期原发性肝癌免疫治疗研究进展

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果