永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对细胞增殖的影响

摘要

背景:
　　中国的食管癌发病率和死亡率均远高于世界平均水平，细胞增殖异常与食管癌的发生发展密切相关。核干细胞因子(nucleostemin，NS)是一个重要的细胞增殖调节因子，可维持干细胞和癌细胞的增殖，并保持细胞不分化。本项目在前期研究的基础上，将采用永生化食管上皮细胞系（SHEE）及其恶变细胞系（SHEEC），测定SHEE及SHEEC中NS、细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）和抑癌基因PTEN的mRNA和蛋白的表达变化，用RNA干扰技术降低NS表达，观察对细胞恶性变的影响。本项目对揭示NS在SHEEC食管癌细胞中对细胞增殖的影响具有重要意义。
　　目的:
　　观察永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对细胞增殖的影响
　　方法:
　　1.SHEE和SHEEC细胞传代培养，应用RT-PCR及Western Blot方法分别检测SHEE和SHEEC细胞中NS、细胞周期蛋白B1（cyclinB1）及人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）的表达。
　　2.设计并合成NS siRNA，转染SHEEC细胞，实验分为3组，分别为试剂对照组（Mock）、阴性对照组（NC）及转染组（NS-1543），应用 RT-PCR及Western Blot方法分别检测各组NS、cyclinB1及PTEN的表达变化。
　　3.应用MTT法检测各组细胞增殖活性，PI染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞周期和凋亡变化。
　　4．统计学处理均采用SPSS17.0统计软件，统计学数据用均数±标准差( X±S)表示，两组均数比较用 t检验；多组均数间的比较采用单因素方差分析，多组均数间的两两比较采用LSD方法，检验水准α=0.05。
　　结果:
　　1.SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTENmRNA相对于SHEE的表达量分别为2.047±0.507、2.214±0.213及0.668±0.188，差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　2.SHEE及SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为（1.142±0.113，3.161±0.108）、（1.585±0.056，2.173±0.058）、（1.894±0.341，1.162±0.524），均为P＜0.05。
　　3.沉默SHEEC中NS表达后，Mock组、NC组和NS-1543组Cyclin B1、PTEN mRNA和蛋白相对表达量分别为（1.057±0.054，0.998±0.104，0.621±0.133）、（1.069±0.059，0.999±0.085，2.319±0.148）和（1.913±0.177，1.735±0.275，0.597±0.103）、（0.791±0.382，0.880±0.077，2.409±0.058），均为P＜0.05。
　　4.下调SHEEC中NS表达量后，Mock组、NC、NS-1543组细胞凋亡率分别为7.233±0.427、9.318±0.703、33.667±2.517，P＜0.05。细胞周期G0/G1期细胞百分比增加，S期和G2/M期细胞百分比降低，P＜0.05。
　　5.下调SHEEC中NS表达，转染24h、36h及48h的NS-1543组细胞增殖活性分别较Mock组和NC组降低，P＜0.05，差异均具有统计学意义。
　　结论:
　　1.沉默NS表达可阻滞细胞周期于G0/G1期，抑制SHEEC细胞的增殖，促进细胞凋亡，且伴随Cyclin B1表达的降低和PTEN表达的增加。
　　2.NS可以促进SHEEC细胞的增殖。

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中英文缩略词表

1 前言

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

3. 结果

3.1 RT-PCR检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的mRNA表达变化

3.2 Western blot检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的蛋白表达变化

3.3 NS基因抑制结果

4 讨论

4.1 NS、Cyclin B1及PTEN在SHEE、SHEEC及基因沉默SHEEC细胞中的表达

4.2 设计合成针对NS的siRNA及其干扰效果

4.3 NS（核干细胞因子）是细胞增殖调节因子

4.4 NS表达下调对细胞凋亡及周期的影响

4.5 NS siRNA干扰的临床应用前景

结论

参考文献

综述： 核干细胞因子与肿瘤的研究进展

个人简历

致谢