布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床与基础研究

摘要

本文对布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床与基础进行了研究。本研究分为五个部分：
　　第一部分：布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床病理特征。
　　目的：研究布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床病理特征。
　　方法：回顾分析1998年7月-2010年8月间根治性切除的BCS相关HCC38例，随机抽取同期根治性切除的HBV相关HCC210例。
　　结果：BCS相关HCC和HBV相关HCC比较，前者女性占优势，后者男性占优势(P<0.05)；前者均伴有不同程度肝硬化，后者肝硬化发生率为78.1％(P<0.05)；前者肿瘤单发较后者多(P<0.05)；前者肿瘤浸润性生长较后者少(P<0.05)；前者肿瘤位于肝脏边缘或外生性生长较后者多(P<0.05)；前者肿瘤门静脉血管侵犯率低于后者(P<0.05)；前者肿瘤分化程度好于后者(P<0.05)。两者在病人的年龄、肝功能Child-Pugh分级、血清AFP阳性率、肿瘤大小和胆管侵犯率之间无显著差异(P>0.05)。
　　结论：BCS相关HCC的临床病理与HBV相关HCC有明显差异。这一差异提示二者发病机制和生物学行为存在差异。
　　第二部分：手术治疗在布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床应用研究。
　　目的：探讨手术切除在布加氏综合征相关肝细胞性肝癌中的安全性及预后。
　　方法：回顾性分析1998年7月-2010年8月期间38例BCS相关HCC手术切除病人的临床资料。
　　结果：38例BCS相关HCC病人中,22例肿瘤切除并肝静脉流出道梗阻解除，16例单纯肿瘤切除而肝静脉流出道梗阻未解除；前者的中位生存时间为110个月，明显长于后者的49个月(P<0.05)；肿瘤切除并肝静脉流出道梗阻解除者与单纯肿瘤切除而肝静脉流出道梗阻未解除者的并发症发生率分别为9.1%、37.5%(P<0.05)，并发症死亡率分别为4.5%、31.2%(P<0.05)。多因素分析显示，肝静脉流出道梗阻解除是影响布加氏综合症相关肝细胞性肝癌生存期的保护因素，而门静脉血管侵犯是影响生存期的危险因素。
　　结论：对于BCS相关HCC病人，在肿瘤根治性切除同时解除肝静脉流出道梗阻可以减少并发症的发生、延长生存时间。
　　第三部分：ER受体在布加氏综合征相关肝细胞癌中的表达。
　　目的：探讨ER受体在BCS相关HCC和HBV相关HCC中的表达及意义。
　　方法：应用免疫组化SABC法检测ERα、ERβ受体在38例BCS相关HCC组织和50例HBV相关HCC组织中的表达。
　　结果：免疫组织化学检测在38例BCS相关HCC组织标本中ERα阳性率为71.05%，50例HBV相关HCC组织中阳性率为32%，二者有显著性差异(p<0.01)。在38例BCS相关HCC组织标本中ERβ阳性率为68.4%，50例HBV相关HCC组织中阳性率为26%，二者有显著性差异(p<0.01)。
　　结论：ER受体表达可能对BCS相关HCC和HBV相关HCC细胞生物学特性差异有重要影响。
　　第四部分：雌激素对布加氏综合征相关肝细胞癌细胞增殖的影响。
　　目的：探讨雌激素在体外对BCS相关HCC细胞增殖和细胞周期的影响
　　方法：戊酸雌二醇培养BCS相关HCC细胞，48小时后用MTT比色法检测不同浓度的戊酸雌二醇注射液对布加氏综合征相关肝癌活细胞总数的影响；流式细胞仪分析检测细胞周期的变化；用Western Blot检测缺氧条件下不同浓度的戊酸雌二醇注射液CyclinD1、CyclinE和CyclinA蛋白表达的影响。
　　结果：随着戊酸雌二醇注射液浓度增加，BCS相关HCC细胞增殖活性明显增加；G0/G1期细胞减少，S期、G2/M细胞增多。Western Blot检测结果表明：随着随着戊酸雌二醇注射液浓度增加，CyclinD1和CyclinA蛋白表达增加（P<0.001），CyclinE表达水平无明显变化(P>0.05)。
　　结论：雌激素在体外可以增加BCS相关HCC细胞增殖活性，促进肝癌细胞周期，而且随着雌激素水平的增加，对细胞增殖和周期的促进作用进一步加强，可能与雌激素影响CyclinD1和CyclinA表达的有关。
　　第五部分：雌激素对布加氏综合征相关肝细胞癌细胞凋亡的影响
　　目的：探讨雌激素在体外对BCS相关HCC细胞凋亡的影响
　　方法：戊酸雌二醇培养BCS相关HCC细胞，48小时后阿霉素诱导凋亡，用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；Caspase-3活性检测；用RT-PCR检测不同浓度戊酸雌二醇培养下布加氏综合征相关肝细胞癌细胞Survivin和Bcl-2 mRNA的表达。
　　结果：随着戊酸雌二醇注射液浓度增加，BCS相关HCC细胞在阿霉素诱导凋亡后，流式细胞仪检测不同浓度戊酸雌二醇注射液终浓度的处理组（0μg/ml、0.02μg/ml、0.2μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml）凋亡率分别为61.6%、53.9%、39.2%、31.3%、24.6%、19.1%。Caspase3活性检测结果：0.02μg/ml、0.2μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml处理组Caspase-3活性较0μg/ml组降低了2.6、5.8、8.9、12.5、17.9倍。RT-PCR检测结果显示随着戊酸雌二醇浓度的增加，Survivin和Bcl-2 mRNA的表达逐渐增加。
　　结论：雌激素水平在体外抑制BCS相关HCC细胞凋亡，且对肝癌细胞凋亡的抑制作用随着雌激素水平的增加而加强，可能与雌激素诱导Survivin和Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的活性有关。

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缩略词对照

前言

参考文献

第一部分：布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床病理特征

1 临床资料和方法

1.1 临床资料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 手术治疗在布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的临床应用研究

1 临床资料与方法

1.1 临床资料

1.2 方法

2. 结果

2.1不同手术方式对BCS相关HCC治疗结果

2.2 生存分析

3 讨论

参考文献

第三部分 雌激素水平对布加氏综合征相关肝细胞性肝癌的影响

第一节 ER受体在布加氏综合征相关肝细胞癌组织中的表达

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二节 雌激素对布加氏综合征相关肝细胞癌细胞增殖的影响

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三节 雌激素对布加氏综合征相关肝细胞癌细胞凋亡的影响

材料和方法

结果

讨论

参考文献

综述:布加氏综合征相关肝细胞性肝癌研究现状

攻读学位期间发表的第一署名文章：

致谢