KLF9在食管癌和食管不典型增生中的表达及意义

摘要

背景和目的：
　　食管癌(esophageal carcinoma)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类的健康。食管癌的发生一般要经过不典型增生、原位癌、浸润癌、转移癌等阶段，且其起病隐匿，早期一般无症状，当症状明显时，大部分已进入中晚期。目前，不典型增生和原位癌可以完全治愈，早期癌治疗效果及预后也较好。而中晚期食管癌患者治疗手段局限，大部分患者发现时已不适合手术，5年生存率不足20％。因此，食管癌重在早期诊断。KLF家族中KLF9被认为是重要的肿瘤抑制基因，在多种肿瘤中起抑制癌症发生的作用，但是关于KLF9与食管癌及其癌前病变关系的研究较少。本课题主要研究KLF9在食管癌和癌前病变组织中的表达情况，探讨其与食管癌发生发展的关系，并就KLF9基因表达与食管癌相关性分析进行研究。
　　材料和方法
　　1、标本来源 RTQ-PCR标本收集自2014年9月-2015年3月郑州大学第二附属医院胸外科新鲜标本40例,包括20例食管癌组织，20例对应的正常食管组织(至少距肿瘤边缘3cm)，标本获取后冻存于-80℃超低温冰箱备用。免疫组化标本来自郑州大学第二附属医2012-2015年病理科存档蜡块60例，包括30例食管不典型增生，30例食管癌，对照组选取正常食管黏膜组织30例。所有标本均经病理学证实,术前未做任何放疗、化疗、生物治疗、免疫治疗及生物化学毒性。所有标本均有完整的临床病历资料。
　　2、方法采用免疫组织化学法检测食管癌组织、食管不典型增生组织及正常食管组织中 KLF9蛋白表达；采用荧光定量 PCR（RTQ-PCR）法检测食管癌组织及配对正常组织中mRNA。
　　3、统计学处理用SPSS17.0软件进行统计学分析。免疫组化评分参考IRS评分法。统计KLF9在正常食管组织、食管不典型增生及食管癌组织中的表达差异用四格表?2检验或校正?2检验。食管癌组织阳性表达与其临床参数间的差异用四格表?2检验或Fisher精确概率法。KLF9mRNA在正常食管与食管癌癌组织的关系采用相对定量△△Ct法分析数据。
　　结果
　　1、食管不典型增生和食管癌组织中，KLF9蛋白阳性主要表达于细胞核,表现为胞核呈黄色、棕色或棕褐色颗粒，而在正常食管组织，KLF9可表达于包浆、包膜和胞核。KLF9在正常食管组织、食管不典型增生、食管癌中的阳性表达率分别为90%(27/30)、80%(32/40)、45%(18/40),呈逐渐下降趋势;与正常食管组织相比，不典型增生组织的表达量明显降低（p=0.002）。与正常食管组织相比，食管癌组织的表达量明显降低(P＜0.001)。KLF9蛋白在食管癌组织阳性表达与患者的性别、年龄、有无淋巴结转移无显著关联(P＞0.05),与肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和肿瘤大小之间均有明显的相关性(P＜0.05)。
　　2、KLF9mRNA的相对表达水平用2-△△ct法来计算，结果显示食管癌组织中KLF9 mRNA水平较正常食管组织明显下降，两者差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　结论
　　1、KLF9蛋白和KLF9mRNA在食管癌组织中表达下调，提示其正常表达与食管癌的发生关系密切。
　　2、KLF9蛋白在食管不典型增生中表达下调，提示 KLF9表达下调的不典型增生可能更具癌变的倾向。
　　3、KLF9在食管癌组织中表达与食管癌的大小、分化程度、浸润深度有关，提示KLF9的异常表达与食管癌的恶性发展有关。

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引言

材料和方法

1 材料

1.1 标本采集

1.2标本入选标准

1.3主要实验试剂及溶液配制

1.4主要实验器材

2实验具体方法及统计学处理

2.1病理切片准备

2.2 HE 染色(Haematoxylin and Eosin)

2.3 免疫组织化学染色(Immunohistochemical Staining )

2.4 荧光定量PCR(RT-QPCR)

结果

1 免疫组化结果分析

1.1 KLF9蛋白在正常食管组织、食管不典型增生组织和食管癌组织中的表达

1.2 KLF9蛋白在食管癌组织中的阳性表达与食管癌临床参数的关系

2 荧光定量PCR（RTQ-PCR）结果分析

讨论

结论

附图

参考文献

综述:KLF家族与恶性肿瘤的关系

附录缩略词中英文对照表

个人简历及攻读硕士研究生期间发表的文章

致谢