USP39在卵巢癌顺铂化疗耐药中的表达情况及对细胞耐药性的影响

摘要

背景及意义：
　　卵巢癌作为一种恶性程度极高的妇科肿瘤，预后不良，大多数患者就诊时已为晚期，并且70％左右的卵巢癌患者会在两年内肿瘤复发。目前，卵巢癌的主要治疗方法是以手术为基础，联合辅助化疗。随着卵巢癌腹腔镜手术及机器人辅助手术、辅助化疗的改进，一定程度上改善了卵巢癌患者的围手术期效果及预后，但由于化疗药物的毒副反应及耐药性的存在，多数卵巢癌患者经过初始治疗后会出现化疗耐药、肿瘤复发、广泛转移等，甚至导致患者死亡。晚期卵巢癌5年生存率小于30%。几乎所有的患者都会产生原发性或获得性的化疗耐药，而发生化疗耐药的卵巢癌患者的治疗非常棘手，严重影响患者生存质量。因此，探索新的改善卵巢化疗敏感性的治疗方法，提高卵巢癌患者的无进展期和总生存期，已刻不容缓。
　　泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin specific peptidase39，USP39)基因位于人染色体2p11.2，调节纺锤体组装检查点和有丝分裂，参与mRNA剪切及剪切小体的组成，在细胞有丝分裂中维持纺锤体检验点完整性，确保细胞成功有丝分裂，也参与了肿瘤的发生与发展。已有文献报道，卵巢癌的发生、发展与USP2、USP7、USP14等有密切关系。Liu S等发现USP39抑制乳腺癌细胞的凋亡，促进乳腺癌的发生、侵袭、转移，影响乳腺癌患者预后。也有文献报道，USP39与肝癌、甲状腺髓样癌、口腔鳞状细胞癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌、胃癌、食管癌的增殖和凋亡有关。本课题组前期研究发现，USP39基因在卵巢癌组织中表达升高，体内及体外实验中发现，USP39可促进卵巢癌细胞增殖、侵袭、转移，并抑制细胞凋亡。USP39基因参与该过程可能是通过调控Aurora B基因的表达，影响PI3K/AKT信号通路活性实现的。然而，USP39是否参与卵巢癌顺铂化疗耐药目前还无相关研究，卵巢癌顺铂化疗耐药细胞中USP39是否高表达、沉默USP39表达是否可改善卵巢癌化疗耐药等问题仍然不是很清楚。本研究旨在为改善卵巢癌患者顺铂化疗耐药提供一个新的思路。
　　目的：
　　检测USP39基因在顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP及其亲本敏感细胞株OVCAR-3中的表达差异，USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞沉默USP39基因表达，分析USP39基因沉默后卵巢癌细胞增殖及对顺铂化疗敏感性的变化，为临床上逆转卵巢癌化疗耐药提供一个新的思路。
　　方法：
　　1、应用反转录聚合酶链式反应和蛋白印迹方法检测USP39 mRNA和蛋白在OVCAR-3/DDP及OVCAR-3细胞中的表达情况。
　　2、USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞，反转录聚合酶链式反应和蛋白印迹方法检测转染后细胞中USP39基因的表达量。
　　3、CCK-8法检测转染细胞的增殖情况及对顺铂化疗耐药性的变化。
　　结果：
　　1、USP39在OVCAR-3/DDP细胞中mRNA的相对表达量是OVCAR-3细胞的（2.69±0.62）倍，蛋白表达量是OVCAR-3细胞的（2.21±0.53）倍，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示USP39在卵巢癌顺铂化疗耐药细胞株OVCAR-3/DDP中的表达显著高于亲本细胞株OVCAR-3中的表达。
　　2、USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞后，以对照组（未转染组）OVCAR-3/DDP细胞内USP39的mRNA和蛋白水平为100%， USP39在实验组（USP39-siRNA转染组）OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞中的mRNA表达水平为（19.28±2.92）%，蛋白表达水平为（18.25±2.81）%，与OVCAR-3/DDP细胞组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。USP39在空白组（USP39对照序列转染组）OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞中的 mRNA表达水平为（102.07±3.73）%，蛋白表达水平为（99.14±1.29）%，与OVCAR-3/DDP细胞组相比，无显著差异（P＞0.05）。
　　3、三组细胞分别和顺铂共同孵育24h、48h、72h后，与对照组OVCAR-3/DDP细胞及空白组OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞相比较，实验组OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞增殖速度明显降低、对顺铂的抑制率明显升高；与不同浓度的顺铂共同孵育后，空白组OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞（IC50=（182.09±20.17）μmol/L）与对照组OVCAR-3/DDP细胞（IC50=（191.33±32.53）μmol/L）相比，差异无统计学意义（P＞0.05），与实验组OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞组顺铂的IC50值为（47.24±3.17）μmol/L，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1、USP39基因在OVCAR-3/DDP细胞中的表达显著高于OVCAR-3细胞。
　　2、沉默USP39基因表达可抑制OVCAR-3/DDP细胞增殖能力及改善顺铂化疗敏感性。
　　3、USP39基因促进卵巢癌顺铂化疗耐药产生，可作为卵巢癌顺铂化疗耐药新的治疗靶点。

目录

声明

中英文对照缩略词

前言

1 实验材料

2 实验方法与步骤

实验结果

1 USP39在耐药细胞株OVCAR-3/DDP中的表达情况

2 USP39-siRNA转染后OVCAR-3/DDP细胞中USP39基因表达水平

3 USP39-siRNA 转染后 OVCAR-3/DDP 细胞对顺铂耐药性的影响

讨论

一 卵巢癌与化疗耐药

二 USP39的生物学特性

三 USP39与卵巢癌及卵巢癌化疗耐药的关系

实验结论

参考文献

综述:USP39在恶性肿瘤中的研究进展

个人简历

致谢