ZAC和ZAC△ZF对胃癌细胞增殖的抑制效应

摘要

研究背景：
　　调控细胞周期阻滞和细胞凋亡的锌指蛋白(zinc finger protein which regulates apoptosis and cell cycle arrest，ZAC)基因是一种抑癌基因，其定位于人类染色体6q24-25。ZAC基因所编码的蛋白是具有7个锌指结构域的转录因子，其可诱导细胞凋亡和细胞 Gl期阻滞，从而达到抑制肿瘤细胞生长的目的。锌指是ZAC蛋白的DNA结合结构域。ZAC不仅可以作为转录因子，而且可以作为p53和其它核受体的转录辅因子，抑制肿瘤细胞生长。但其作用机制不明。
　　研究目的：
　　比较ZAC和锌指缺失ZAC（ZAC△ZF）质粒转染对胃癌细胞增殖的效应，探讨锌指在此过程的作用及其机制。
　　材料与方法：
　　1. ZAC及ZAC△ZF真核表达载体的鉴定将ZAC以及ZAC△ZF质粒转化至大肠杆菌DH5α，提取目的DNA质粒，进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。
　　2.实验分组将胃癌细胞BGC823和SGC7901随机分为4组：实验组为2组，分别用LipofectamineTM2000转染试剂转染ZAC质粒和ZAC△ZF质粒；对照组为空质粒转染和无转染。转染后，分别培养24h、48h和72h。
　　3. ZAC及ZAC△ZF对胃癌细胞增殖的效应应用MTT技术，分别检测4组细胞24h、48h和72h的细胞增殖。
　　4. ZAC及ZAC△ZF对胃癌细胞系ZAC及acK14-H3免疫反应性的效应应用荧光免疫组织化学技术，分别检测4组细胞 ZAC及 acK14-H3的免疫反应性（immunoreactivity, IR）。
　　5. ZAC及 ZAC△ZF对胃癌细胞 ZAC免疫沉淀复合物的效应应用免疫沉淀（immunoprecipitation, IP）-PAGE-银染技术，检测4组细胞ZAC IP复合物的成分。
　　6.统计学处理所有的实验数据都是用均数±标准差(?x± S)来表示，应用SPSS17.0统计软件进行处理数据，两组比较采用 t检验，多组比较采用方差分析，并采用 SNKt检验进行多重比较，P＜0.05为差异性有统计学意义。
　　结果：
　　1. ZAC和ZAC△ZF真核表达载体的鉴定琼脂糖凝胶电泳分析显示，ZAC以及ZAC△ZF质粒DNA片段长度与预期一致。ZAC以及ZAC△ZF质粒序列分析结果与GenBank序列一致。
　　2. ZAC及ZAC△ZF对胃癌细胞增殖的效应胃癌细胞SGC-7901培养24h、48h和72h后4组细胞的A值分别为：对照组，0.575±0.021、0.755±0.046和0.886±0.031；空质粒组，0.542±0.035、0.698±0.026以及0.756±0.018；ZAC组，0.286±0.015、0.203±0.018和0.155±0.013；ZACΔZF组，0.305±0.029、0.258±0.031和0.209±0.011。胃癌细胞BGC823培养24h、48h和72h后4组细胞A值分别为：对照组，0.712±0.021、0.841±0.019和0.933±0.050；空质粒组，0.675±0.018、0.758±0.023和0.836±0.006；ZAC组，0.375±0.015、0.238±0.024和.161±0.018；转染ZACΔZF质粒组分别为：0.401±0.031、0.316±0.038以及0.208±0.0210。结果显示，实验组与对照组进行比较，实验组的细胞增殖能力明显下降（P<0.01）。结果表明，ZAC质粒和ZAC△ZF质粒均可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖，尽管ZAC△ZF的抑制效应较ZAC弱，但二者无显著性差异（P＞0.05）。
　　3. ZAC及ZAC△ZF对胃癌细胞ZAC及acK14-H3免疫反应性的效应 BGC-823细胞对照组组、空质粒组、ZAC组和ZACΔZF组ZAC IR分别为0.386±0.016、0.391±0.018、0.713±0.031和0.684±0.012；SGC-7901细胞分别为0.457±0.038、0.481±0.021、0.732±0.019和0.699±0.026。对照组平均阳性细胞率均显著低于实验组（P＜0.01），但ZAC组与ZAC△ZF组无显著性差异（P＞0.05）。BGC-823细胞对照组组、空质粒组、ZAC组和ZACΔZF组acK14-H3 IR分别为0.451±0.028、0.510±0.019、0.707±0.034和0.678±0.021；SGC-7901细胞分别0.508±0.022、0.544±0.031、0.746±0.017和0.712±0.014。结果显示，对照组的平均阳性细胞率均显著低于实验组（P＜0.01）；但ZAC组与ZAC△ZF组无显著性差异（P＞0.05）。
　　4.ZAC及ZAC△ZF对胃癌细胞ZAC IP复合物的效应4组细胞ZAC IP复合物的带型相同，均显示3条主带。根据分子量的大小，3条主带分别命名为带1、带2和带3。SGC-7901细胞，对照组组、空质粒组、ZAC组和ZACΔZF组带1灰度值分别为0.890±0.016、0.866±0.031、1.026±0.008和0.922±0.016；带2分别为0.758±0.013、0.761±0.022、0.923±0.015和0.868±0.032；带3分别为0.699±0.24、0.702±0.012、0.878±0.017和0.841±0.018。BGC-823细胞，对照组组、空质粒组、ZAC组和ZACΔZF组带1灰度值分别为0.882±0.016、0.841±0.024、1.101±0.017和0.891±0.021；带2分别为0.757±0.019、0.762±0.018、0.911±0.013和0.869±0.012；带3分别为0.679±0.032、0.687±0.029、0.862±0.028和0.834±0.015。结果显示，3个主带灰度值，ZAC及ZAC△ZF组显著大于空质粒组和对照组（P＜0.01）；但ZAC与ZAC△ZF组之间无显著性差异（P＞0.05）。
　　结论：
　　1. ZAC和ZAC△ZF均可抑制胃癌细胞系SGC7901和BGC823的增殖，尽管ZAC△ZF活性较ZAC弱，但二者间无显著性差异。
　　2. ZAC和ZAC△ZF均可上调胃癌细胞组蛋白H3的乙酰化，二者无显著性差异。
　　3.ZAC和ZAC△ZF转染后ZAC IP复合物成分相同。

目录

声明

中英文缩略词

1 前言

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 主要实验方法

3 结果

3.1 ZAC及ZAC△ZF表达载体的鉴定

3.2 ZAC及ZAC△ZF转染对胃癌细胞系细胞增殖的效应

3.3 ZAC及ZAC△ZF质粒转染对胃癌细胞ZAC及acK14-H3免疫反应性的效应

3.4 ZAC及ZAC△ZF质粒转染对胃癌细胞ZAC IP复合物的效应

附图

4 讨论

5 结论

参考文献

综述:肿瘤抑制基因ZAC与相关肿瘤发生

个人简历、及在学期间发表的学术论文及研究成果

致谢