番茄晚疫病抗病信号传导突变体筛选

摘要

番茄晚疫病对番茄的生产造成了严重的经济损失。由于化学药剂防治晚疫病不仅影响环境、防治难度大、而且致使病原菌产生抗药性，因此探索晚疫病抗病基因的抗病机理，了解抗病信号的传导途径就显得尤为重要，发现信号途径中的关键基因必将为晚疫病的防治开辟一个新的领域。
　　 利用在番茄中构建的一个含有抗晚疫病基因R3a和诱导表达相应的无毒基因Avr3a的高效研究系统：MM-R3a-Avr3a，用于构建EMS突变体库，在M2群体中施用诱导剂筛选存活突变体，通过对一系列阻断R3a-Avr3a互作的突变体的分子鉴定、遗传分析和表型鉴定，为参与抗病信号途径中的关键基因克隆提供研究基础。在对突变体进行分子鉴定时，采用碱裂解法提取番茄DNA，大大提高了实验效率。本研究主要结论如下：
　　 1.以番茄子叶和幼嫩叶片为材料，使用碱裂解方法提取的DNA纯度和质量浓度相对较高，以稀释10～30倍的DNA为模板的PCR结果相对稳定。
　　 2.经过三代检测和筛选，最终得到了6个重点家系，并且确定了这6个家系的突变体特性。130、208、1926为显性突变，且130为单基因显性突变；821、1057、1601为隐性纯合突变。
　　 3.对杂交后代过敏性反应反应进行分析，确定1057和821两个家系为关键基因突变；1601为R3a、Avr3a+GVG突变。
　　 4.突变体表现出特殊的田间突变性状：薯叶、有限生长型、复式花序、矮生、叶下垂、卷叶。这些性状有可能与突变基因连锁，为以后的基因定位提供了一定的参考信息。