河南省羊源硬蜱种类鉴定及无浆体、梨形虫携带情况调查

摘要

硬蜱为羊群间病原传播的重要媒介，据报道约10％的蜱类携带病原体，不同硬蜱种类传播病原体种类不同，可致使多种疾病在羊群中暴发，对羊群危害极大，严重影响畜牧业的健康发展。因此研究清楚当地流行硬蜱种类及其病原携带情况具有重要的意义。无浆体Anaplasma和梨形虫Piroplasm病为羊群间常见的血液原虫病，本研究初次对河南省流行硬蜱中前述2种病原的携带情况进行凋查，为蜱传病研究提供参考依据及理论基础。
　　本试验从2011年7月-2012年9月对河南省郑州、洛阳、南阳等20个县市的386只羊体表寄生硬蜱进行种类鉴定，在光学显微镜下对其进行形态学描述，参考历史资料初步确定硬蜱种类;利用常规PCR技术对羊源硬蜱进行基于核糖体小亚基(16S rDNA)和ITS-2两个基因位点进行序列分析，鉴定河南省羊源硬蜱流行种类及其基因型，确定河南省羊源硬蜱和我国已报道同种类硬蜱之间的分子种系进化关系;并使用MEGA等序列分析软件对河南省不同地区所测得硬蜱序列进行差异比对，以此来分析河南省不同地区间流行硬蜱种类的血缘关系，结果发现采自河南省20个县市羊体表感染蜱类均为长角血蜱H.longicornis，16S rDNA基因序列B(l)AST结果显示均与兰州株长角血蜱(FJ712721.1)同源性达99％，与四川(JF979373.1)、河北株(JF979374.1)长角血蜱相似性99.9％，E值均为0;ITS-2基因序列BLAST结果显示均与河北株(JQ346683)相似性99％，E值均为0;对测序结果中26条（每个地区选1-2条）16S rDNA序列进行序列差异性及同源性分析，26条序列间差异性小，仅存在少数碱基的替换或缺失。序列间同源性分析结果显示同源性最大的数值为100％，最小数值为82.7。为蜱类系统研究及蜱传病防控奠定了基础。
　　为了解河南省硬蜱携带无浆体Anaplasma及梨形虫Piroplasma病原情况，对上述DNA样品132份，利用常规PCR和巢式PCR技术进行了检测。对所有样品扩增后，发现无浆体阳性34份，阳性率:22.7％，其中A.ovis阳性3份，阳性率:2.3％、A.bovis阳性27份，阳性率:20.4％;A.phagocytophilum阳性4份，阳性率:3.0％;同时感染2份无浆体种样品数为1份，阳性率:0.76％;Theileria luwenshuni阳性率:14.4％，Babesia motasi阳性率:0.75％。
　　本研究结果表明，长角血蜱为河南省流行蜱类优势种群，虫体携带病原情况普遍，尤其是在样品中检测到了人畜共患病原嗜吞噬细胞无浆体，可见河南省应加强蜱类的防控工作，从控制传染源、保护易感动物、切断病原传播途径三方面入手，有效的保护动物健康，为人畜健康和畜牧业的快速发展提供保障。

目录

声明

致谢

摘要

文献综述

第1章 河南省羊体寄生硬蜱种类鉴定

1 材料与方法

1．1 样品采集

1．2 样品制片与保存

1．3 虫体种类鉴定

2 结果与分析

2．1 形态学观察结果

2．2 分子生物学鉴定结果

2．3 测序结果分析

3 讨论

3．1 河南省羊仅感染长角血蜱

3．2 河南省蜱类资源丰富，但研究相对落后

3．3 不同月份流行硬蜱种类不同

3．4 分子生物学技术使蜱的分类更加精确

第2章 河南省羊源硬蜱携带无浆体情况调查

1 材料与方法

1．1 样品的采集

1．2 样品的保存

1．3 虫体组织DNA的提取

1．4 引物设计

1．5 PCR反应

1．6 琼脂糖电泳检测

2 结果

3 讨论

3．1 长角血蜱携带羊无浆体病病原，是中原地区的优势蜱种

3．2 嗜吞噬细胞无浆体感染率较低

3．3 研究羊无浆体对养羊业有重要的意义

3．4 蜱传病防范

第3章 河南省羊源硬蜱携带梨形虫病原情况调查

1 材料与方法

1．1 样品的采集

1．2 样品的保存

1．3 虫体组织DNA的提取

1．4 引物设计

1．5 PCR反应

1．6 琼脂糖电泳检测

2 结果与分析

3 讨论

3．1 梨形虫暴发与硬蜱流行季节相关

3．2 长角血蜱是羊泰勒虫和巴贝斯虫的传播媒介

3．3 灭蜱是防治羊梨形虫病的最有效的措施

参考文献

附表Ⅰ 蜱分类检索表