不同趾型贵妃鸡杂交、测交群体的多趾性状分析及其候选基因的表达

摘要

贵妃鸡是法国一个古老的品种，因其特殊的冠型而命名，是少有的五趾品种之一。自2003年贵妃鸡引进中国以来，对其的研究主要集中在生产性能、配套利用和营养方面，但对五趾性状的研究报道较少。本研究围绕贵妃鸡的五趾性状展开研究，首先，通过不同趾型鸡的杂交实验（3个杂交组合分别为:四五趾♂×四五趾♀、四五趾♂×五五趾♀、五五趾♂×五五趾♀）和测交实验（共9只公鸡，每1只五五趾公鸡×4只四四趾母鸡）对贵妃鸡多趾性状的遗传方式进行分析;然后，利用国内地方鸡多趾性状已知的分子标记对贵妃鸡及地方鸡进行多趾分型;最后，本试验以双亲都为多趾的贵妃鸡的胚胎，采集头部、躯体和肢芽组织样品，利用荧光定量PCR的方法，检测了与鸡多趾性状相关的6个候选基因在胚胎发育5-10天的表达。得出以下主要结果:
　　1.四五趾×四五趾组合的初生重显著低于其它两个组合(P＜005)。四五趾♂×四五趾♀杂交组合后代多趾与四趾比例为367∶1，符合3∶1的显性理论比值。五五趾♂×五五趾♀和四五趾♂×五五趾♀杂交组合后代的趾型比例不符合理论比例。三个杂交组合的多趾的外显率分别为78.57％、77.70％、90.58％。
　　2.贵妃鸡1-7号公鸡是五趾杂合子，应该淘汰;8号和9号公鸡后代的五趾外显率分别为87.50％、94.11％，可能为五趾纯合子，可以用于多趾群体的扩繁。贵妃鸡多趾性状相对于四趾是显性遗传，但有着不同的外显率。
　　3.鸡Lmbr1基因C4645A位点SNP检测能够检测卢氏鸡、固始鸡和丝毛乌骨鸡的基因型，并能与多趾性状完全关联。但该位点的突变并不能检测出贵妃鸡多趾性状的基因型。
　　4.在胚胎发育的头部组织中，Lmbr1、SHH和MNX1基因的表达量先下降后升高。RNF2、NOM1、Gli3的表达量逐渐降低;在躯体组织中，除了Lmbr1基因第9天表达量显著升高（P＜0.05），其它候选基因表达量变化范围较小;在肢芽组织中，候选基因的表达量趋势较为一致，Lmbr1、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3基因在第7天和第9天出现表达峰值。SHH基因在胚胎发育的第6-10天的表达量一直很低。综上，决定多趾性状形成的主要部位为肢芽组织，推测第7-9孵化日龄是多趾形成的关键时期。
　　综上所述，试验结果显示贵妃鸡多趾性状也为常染色体显性遗传，但多趾性状外显率不同，双亲都为多趾的个体后代出现四趾个体的原因，可能是由于基因的遗传修饰造成的，也可能是多基因调控的结果。Lmbr1基因C4645A位点不能用于贵妃鸡多趾基因型的检测，贵妃鸡多趾性状分子标记需要进一步研究。在肢芽组织中，候选基因的表达量趋势较为一致，Lmbr1、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3基因在第7天和第9天出现表达峰值。SHH基因在胚胎发育的第6-10天的表达量一直很低，肢芽组织应该是决定贵妃鸡多趾性状形成的主要部位，孵化的第7-9天可能是多趾性状形成的关键时期。

目录

声明

致谢

论文说明

摘要

1 文献综述

1．1 贵妃鸡及其研究进展

1．1．1 贵妃鸡介绍

1．1．4 贵妃鸡的肉品质和产蛋性能的研究进展

1．2 多趾性状的分类及其研究进展

1．2．1 多趾性状的特点和分类

1．2．2 哺乳动物多趾性状的研究进展

1．2．3 鸡多趾性状的研究进展

1．3 分子标记在家禽包装性状研究中的应用

1．4 实时荧光定量PCR技术

1．4．1 原理和方法

1．4．2 定量方法

1．4．3 荧光定量的应用

2 引言

试验一、不同趾型贵妃鸡杂交组合群体多趾性状的遗传规律分析

3．1 材料与方法

3．1．1 杂交素材

3．1．2 杂交方法

3．1．3 孵化管理

3．1．4 繁殖性能的计算方法

3．1．5 趾型检测方法

3．2．1 杂交后代四五趾的左右脚分布情况

3．2．2 贵妃鸡杂交组合孵化性能和初生重计算结果

3．2．3 贵妃鸡杂交组合的趾型统计结果

3．3 讨论

3．3．1 孵化性能和分析

3．3．2 杂交组合后代趾型分析

3．4 小结

试验二、贵妃鸡表型五五趾公鸡基因型的测交分析

4．1 材料与方法

4．1．1 测交素材

4．1．2 测交方法

4．1．3 趾型的检测方法

4．1．4 数据处理和分析

4．2 结果和分析

4．3 讨论

4．4 小结

试验三、鸡多趾性状分子标记(Lmbr1 C4645A)对贵妃鸡和地方鸡趾型性状的检测分析

5．1 材料与方法

5．1．1 试验动物

5．1．2 试验材料

5．1．3 基因组DNA的提取和质量检测

5．1．4 引物和PCR反应

5．1．5 酶切反应

5．1．6 基因分型方法

5．1．7 数据处理

5．2 结果与分析

5．2．1 基因组DNA的质量检测

5．2．2 引物特异性检测

5．2．3 贵妃鸡和地方鸡趾型观察结果

5．2．4 贵妃鸡和地方鸡多趾性状基因分型结果

5．3 讨论

5．4 小结

试验四、贵妃鸡多趾性状候选基因在胚胎发育中期表达规律的研究

6．1 材料与方法

6．1．1 试验动物

6．1．2 仪器设备

6．1．3 药品试剂

6．1．4 鸡胚孵化和样品采集

6．1．5 RNA提取和保存

6．1．6 组织总RNA质量检测

6．1．7 cDNA的合成

6．1．8 荧光定量

6．1．9 数据统计与分析

6．2 结果与分析

6．2．1 组织RNA的质量检测

6．2．2 引物特异性检测

6．2．3 在头部组织的表达

6．2．4 在躯体组织的表达

6．2．5 在肢芽组织的表达

6．3 讨论

6．3．1 候选基因在头部组织中的表达分析

6．3．2 候选基因在躯体组织中的表达分析

6．3．3 候选基因在肢芽组织中的表达分析

6．4 小结

参考文献